实训10 花卉的组织培养

《实训10 花卉的组织培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、实训10花卉的组织培养（综合性实验）背景知识植物细胞的全能性是指植物体的每个具有完整细胞核的细胞，都具有该植物的全部遗传信息和发育成完整植株的潜在能力。植物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，具有发育成为完整个体所必需的全部基因。植物细胞潜在全能性的原因是基因表达的选择性。植物体的每一个活细胞都应该具有全能性。从一个受精卵产生具有完整形态和结构机能的植株，这是全能性，是该受精卵具有该物种全部遗传信息的表现。同样，植物的体细胞，也是从合子的有丝分裂产生的，也具全能性，具备着遗传信息的传递、转录和翻译的能力。植株上某部分的体细

2、胞只表现一定的形态，承受一定功能，这是由于它们受到自身遗传物质的影响以及具体器官或组织所在环境的束缚，致使植株中不同部位的细胞仅表现出一定形态和功能。但其遗传潜力并没有丧失。一旦脱离原来所在的器官或组织，成为离体状态时，在一定的营养、激素和外界条件的作用下，就可能表现出全能性，而生长发育成完整的植株。因此，每一个新形成的细胞都具有广阔的发育前景，它们能向不同的方向分化、发育，这取决于它们周围的物理、化学因素和空间的影响。在分化和发育过程中，一些基因“开启”，一些基因“关闭”，因此成熟细胞的性质取决于活化的基因组合。一个细胞一旦沿某一条特

3、定的途径分化发育后，它一般不再回复到未分化的状态，但在组织培养和某些特定的环境条件下，可能发生脱分化和再分化，最终形成完整植株。一、实训目的通过组织培养实验，初步掌握组培快速繁殖的方法。重点掌握组培过程中无菌接种技术，了解培养基的组成和配制方法。二、原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组

4、织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。三、材料及用具（一）植物材料花卉植物的茎尖、茎段（二）药品1.MS培养基母液：每配一升培养基需大量元素100ml（10倍母液），微量元素100ml（100倍母液）2.植物激素6-BA0.5mg/L，NAA0.05mg/L3.琼脂0.8%，蔗糖3%，0.1NNaOH，0.1NHCl4.75%酒清，85%酒精，无菌水，棉球。（三）用具烧杯500ml二个，吸管若干，橡片吸球一个，三角瓶、封口膜、线绳、无菌水瓶、标签纸、漏斗若干、剪刀、解剖刀、大、小镊子各一把，无菌滤纸数张，无菌烧杯若干个，废液缸一个，酒

5、清灯。四、实验步骤（一）培养基（诱芽）的配制每组500ml，培养基成分MS+BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖3%+琼脂0.8%，pH5.7-6.0。1.称琼脂4g于500ml烧杯中，加蒸馏水约300ml溶化；2.吸加MS母液成分：大量元素50ml，微量元素5ml，有机成分5ml，铁盐2.5ml，激素6-BA2ml，NAA1ml，蔗糖15g于另一烧杯中，加蒸馏水约100ml加热。3.溶解好的琼脂、过滤后的上清液与含MS母液的热溶液混合，用量筒定容至500ml。4.用0.1NNaOH调pH至5.7-6.0。5.用漏斗分装培养

6、基，每三角瓶内装培养基15-20ml。6.封口、捆扎、贴标签。标签的上排写明培养基代号、组号；下排留空，接种后写上品种、接种日期、接种人。（二）培养基的灭菌1.加水至灭菌锅吃水线，放入装好培养基瓶及其器具的内锅（培养基瓶、无菌水瓶、小烧杯、剪子、镊子、解剖刀等），内锅上盖几张报纸，以防水气弄湿器具，再对角旋紧灭菌锅。22.加热升压至0.5kg/cm时，轻轻打开放气阀排汽，待气压指针退至0时关阀门，如此连续三次排气。23.加温升压至1.0kg/cm时，保压（0.9-1.1kg之间）灭菌20分钟。4.保压后，轻轻打开放气阀放气或停止加热，待

7、气压退到20.5kg/cm时再放气。5.放气完毕，迅速取出装有培养瓶的内锅。6.乘热取出三角瓶，平放冷却凝固。7.将无菌烧杯、剪刀、镊子、灭菌滤纸等放入烘箱中烘干、备用。（三）芽的诱导1.外植体：在大田和盆花中切取3-6cm的茎尖部分。2.表面消毒：第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后

8、再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当然，最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备