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1、高效液相色谱法测定藻类中的类胡萝卜素和叶绿素*袁建平张义明史贤明龚贤弟陈峰（华南理工大学轻工食品学院广州510641）（香港大学植物学系）提要提出了用高效液相色谱法测定藻类中类胡萝卜素和叶绿素的方法。采用丙酮等有机溶剂提取藻类中的类胡萝卜素和叶绿素，然后在反相C18柱上进行分离。流动相选用二氯甲烷／乙腈／甲醇／水（22.5:9.5:67.5:0.5），流速为1.0mL/min。用光度检测器检测，波长为450nm。叶黄素、α-胡萝卜素、β胡萝卜素、叶绿素a和叶绿素b的平均回收率分别为99.1%，98.5%，99.4%，100.6%和99.9%，相对标准偏差
2、分别为2.4%，5.6%，6.0%，4.1%和4.0%。关键词高效液相色谱法，类胡萝卜素，叶绿素，藻类分类号O658/S9122.2色素提取1前言（1）量取2mL螺旋藻(Spirulinaplatensis,类胡萝卜亲(carotenoids)和叶绿素(chloro-UTEX1926)培养液，离心后弃去溶液。加入2mLphylls)是各种植物中广泛存在的天然色素，在植物90％丙酮水溶液，置于超声波发生器水浴上使其破体中具有重要的生理功能。叶绿素是植物进行光合碎。离心后取上层清液测定。作用所必需的物质。而类胡萝卜素在强光下可防止（2）取2mL小球藻(Chl
3、orellavulgaris)培养叶绿素的光氧化；在弱光下，可作为辅助色素吸收光液，离心后弃去溶液。用细胞破碎器破碎后加入丙能并传递给叶绿素分子）。类胡萝卜素由胡萝卜素酮，混匀、离心，取上清液测定。(carotenes)和叶黄素类（xanthophylls，为胡萝卜素（3）Haematococcuslacustris色素提取方法同小的含氧衍生物）两部分组成，已发现并分离出来约球藻。600种，且与叶绿素同时存在，因而对类胡萝卜素及3结果与讨论叶绿素的研究较为困难。虽然难以得到所有标准品，但高效液相色谱技术仍被认为是研究类胡萝卜素及3.1类胡萝卜素和叶绿素测
4、定的线性范围叶绿素的有效手段（26。线性试验结果表明，在0～50mg/L范围内，叶螺旋藻等藻类因含有丰富的营养物质而受到人黄素、a-胡萝卜素、β胡萝卜素、叶绿素a和叶绿素们的广泛重视。本文对实验室培养的螺旋藻、小球藻b的浓度均与峰面积呈良好的线性关系，其回归方和Haematococcuslacustris这3种藻类中的类胡萝程分别为（n=6）：卜素和叶绿素的高效液相色谱法（HPLC）测定进行叶黄素：A1=2.933C1-0.900,r1=0.9999;了研究。a-胡萝卜素：A2=3.909C2-1.250,r2=0.9998;β胡萝卜素：A3=3.131
5、C3+0.242,r3=0.9992;2实验部分叶绿素a：A4=0.419C-0.134,r4=0.9997;2.1仪器与试剂叶绿素b：A5=1.061C5+0.608,r5=0.9994.仪器美国BeckmanGold125型高效液相色3.2回收率与精密度试验谱仪，Gold166型光度检测器，GS-15R型离心机，在样品提取过程中分别加入已知量的叶黄素、德国B.Braun细胞破碎器；美国BransonB-15型超a-胡萝卜素、β胡萝卜素、叶绿素a和叶绿素b标样声波发生器。进样测定。由测定结果求得平均回收率分别为试剂叶黄素（Fluka公司，85％ィ），a
6、-胡萝卜99.1%,98.5%,99.4%,100.6%和99.9%。素、β胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b（Sigma公司），重复测定样品（n=6），根据测定结果计算得到甲醇、乙腈、二氯甲烷、丙酮（BDH公司，HPLC级）。叶黄素、a-胡萝卜素、β胡萝卜素、叶绿素a和叶绿*本文为香港RGC和香港大学CRCG资助项目本文收稿日期：1996-01-05，修回日期：1996-03-0素b测定的相对标准偏差（RSD）分别为2.4%,5.6%,6.0%,4.1%和4.0%。3.3藻类样品的测定图1～图3分别给出钝顶螺旋藻、小球藻和Haematococcuslacus
7、tric等3种藻类色素提取液的色谱图，其色谱条件：色谱柱为UltrasphereODS(4.6mm×250mm,Beckman)，流动相为二氯甲烷-乙腈-甲醇-水(22.5:9.5:67.5:0.5)，流速为1.0mL/min，检测波长450nm。色素测定结果见表1，螺旋藻中含有的玉米黄质（3,3'-二羟基-β胡萝卜素）与叶黄素（3,3'-二羟基-a胡萝卜素）性质相近，不能分离，因而表1中螺旋藻的叶黄素含量应包含玉米黄质（1）。Haematococcuslacustris在生长过程中因虾青素（3,3'-二羟基-4,4'-二酮-β胡萝卜素）酯的含量增多而逐
8、渐转变为红色。参考文献1OlaizolaM,DuerrEO.JApplPhyco
