猪胸膜肺炎放线杆菌的分离与鉴定

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1、实验研究猪胸膜肺炎放线杆菌的分离与鉴定邵洪泽，苏双，李萌，任锐（吉林省兽医科学研究所，吉林长春130062）【摘要】吉林省某规模化养猪场送检疑似猪传染性胸膜肺炎的死猪病料，采用不同培养基进行病原菌分离，结果分离出3株疑似胸膜肺炎放线杆菌。通过对分离菌进行镜检、培养特性试验、生化特性试验、PCR鉴定，确定为3株均为胸膜肺炎放线杆菌，致病性试验结果表明，分离的胸膜肺炎放线杆菌具有强致病性。【关键词】胸膜肺炎放线杆菌；分离；鉴定【中图分类号】S852.61+9【文献标识码】A【文章编号】1672－2078（2006）04－0

2、009－03TheIsolationandIdentificationofActinobacillusPleuropneumoniaeSHAOHong-ze，SUShuang，LIMeng，RENRui(VeterinaryresearchinstituteofJilinProvince,Changchun,Jilin130062)【Abstract】TissuesamplesfromonehoggeryinJilinProvince,weredetectedforporcinecontagiouspleuropneu

3、moria.Dif-ferentmediumwereusedtoseparatepathogenicbacteria,threestrainsAPPsuspectedwereseparatedfromthetissuesam-ples.Accordingtoetiologicalmorphologyobservation,culturecharacteristic,biochemicalcharacteristicandPCR,thethreestrainswereallActinobacillusPleuropneu

4、moniae.Theresultsofpathogenicitytestindicated,thethreeseparatedAPPsho-wedhighpathogenicity.【Keywords】ActinobacillusPleuropneumoniae,；Isolation,；Identification猪传染性胸膜肺炎（PorcinecontagiousPleurop-琼脂培养基、绵羊血琼脂培养基、含V因子的绵羊neumoria，PCP）是由胸膜肺炎放线杆菌（血琼脂培养基、含V因子的胰蛋白大豆琼脂培养，AP

5、P）引起的猪的一种高度传基（改良TSA培养基）及部分生化培养基。染性的呼吸系统疾病。本病呈世界性分布，为国际1.2病料来源[1]上公认的危害养猪业最严重的疫病之一。本病以来自吉林省某猪场送检3头份疑似PCP病死急性出血和慢性纤维素性胸膜肺炎为特征，具有较猪的肺脏、肝脏、脾脏病变组织。高的发病率和致死率。该病多呈急性爆发导致病猪死亡，致死率高达80%～100%，一旦发展成为慢1.3金黄色葡萄球菌标准菌株性型，则导致病猪生长缓慢，抵抗力下降，饲料利用购自中国兽药监察所。[2]率降低，养殖成本增加。杨旭夫（1990）首次报道

6、1.4参考阳性菌株本病在我国的的发生并分离到病原菌，近年来，随着我国养猪业规模化、集约化的发展，有关本病发本研究室保存血清4型APP。[3-11]生的报道也随之增多。研究表明猪传染性胸膜1.5PCR引物合成肺炎在我国的流行不仅呈上升趋势，而且所造成的根据已发表的APXⅣA基因序列，参照国内经济损失也越加严重。2004年11月，我们采集吉[12,13]外的文献报道合成引物，序列为：林省某猪场疑似PCP病死猪的病料，进行病原菌上游引物P1：5'tggcactgacggtgatga3'的分离与鉴定。下游引物P2：5'ggcc

7、atcgactcaaccat3'1材料由宝生物工程公司合成。1.1培养基1.6酶类及相关试剂普通琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、巧克力dNTP，10×Buffer，TaqDNAPolymerase，10×LoadingBuffer，100bpDNALadderMarker，均购自宝生物生物工程有限公司（TaKaRa）。电泳缓冲液TAE、0.8%琼脂糖凝胶。收稿日期：2006－02－28吉林畜牧兽医◢2006.04电话/0431-7989877/7989866/79897669实验研究1.7试验动物阴性的小球杆菌，培养72

8、h后形成少量弯曲的长丝健康小白鼠，购自长春市卫生部生物制品研究所。状多形性菌体。2方法3.3生长特性该菌在含V因子的绵羊鲜血琼脂培养基上产2.1病原菌的分离培养生狭窄的溶血环；CAMP试验呈阳性，在葡萄球菌无菌采取疑似PCP肺脏、肝脏、脾脏等病变组接种线边缘见针尖大小、圆形半透明灰白色小菌织，接种于普通琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基