酸性α-淀粉酶产生菌的筛选

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1、—３６０—江苏农业科学２０１３年第４１卷第１２期郭宏文，郭建华，邹东恢，等．酸性α－淀粉酶产生菌的筛选［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１２）：３６０－３６２．酸性α－淀粉酶产生菌的筛选郭宏文，郭建华，邹东恢（齐齐哈尔大学食品与生物工程学院／黑龙江省普通高校齐齐哈尔大学农产品加工重点实验室，黑龙江齐齐哈尔１６１００６）摘要：从北大仓酒厂白酒酒醅分离筛选到１株产酸性α－淀粉酶的菌株Ｃ６，采用液体发酵，３６℃、１８０ｒ／ｍｉｎ振荡培养４８ｈ后产酶活力达到３８８．５Ｕ／ｍＬ。初步研究了酶性质：Ｃ６产生的α－淀粉酶最适反

2、应ｐＨ值为４．８，最适反应温度为６０℃，是一种中温酸性α－淀粉酶，该酶在ｐＨ值３．５～９．０、温度５０℃以下能较稳定地存在。关键词：酸性α－淀粉酶；筛选；酶性质中图分类号：Ｑ９３－３３１文献标志码：Ａ文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１２－０３６０－０２α－淀粉酶作用淀粉时可从分子内部切开α－１，４糖苷子培养基：含可溶性淀粉１．２％、蛋白胨０．８％、酵母粉键，最终产物为糊精、寡糖、麦芽糖和葡萄糖，是国内外最常用０．２％、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４０．１％，ｐＨ值７．０。的一种酶制剂。我国工业生

3、产中常用的中温和高温α－淀粉（５）发酵培养基：含可溶性淀粉１．５％、蛋白胨１．０％、酵母粉酶，其适用ｐＨ值范围为６～７，在酸性条件下使用酶活性明显０畅５％、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４０．１％，ｐＨ值７．０。降低，不能满足一些酸性条件下淀粉原料的深加工工艺要求。１．３主要试剂耐酸性α－淀粉酶是在酸性条件下能水解淀粉的酶类，可以试验用试剂均为分析纯。在低ｐＨ值条件下液化淀粉，保持高活性。耐酸性α－淀粉酶１．４方法显著的耐酸性使其具有很大的应用潜力和开发前景，可以广１．４．１菌种分离初筛将白酒酒醅１０ｇ用

4、１５０ｍＬ无菌生泛应用于食品、发酵、纺织、饲料、医药等多种领域，可以明显理盐水浸泡１ｈ，摇匀后吸取１．０ｍＬ于装有５０ｍＬ富集培养地提高收得率，降低消耗，特别是能节约工业用粮，开发耐酸基的三角瓶中，３６℃振荡培养１８ｈ，取培养液涂布分离培养［１］性α－淀粉酶具有很大的经济、社会效益。自１９６３年日本基平板，３６℃培养４８ｈ，用碘液显色，挑选菌落周围有透明圈［２］学者Ｍｉｎｏｄａ等首次发现黑曲霉可以产耐酸性α－淀粉酶且菌落直径比较大的菌株接到斜面上，对菌株进行纯化分离。以来，许多国家都相继对其展开了研究，在国外已有将酸

5、性淀１．４．２液态发酵将纯化后的菌种接种到装有３０ｍＬ种子粉酶制剂应用于工业生产的报道。国内开展相关研究起步较培养基的三角瓶中，３６℃、１８０ｒ／ｍｉｎ培养１８ｈ，然后取２ｍＬ晚，目前对耐酸性α－淀粉酶的研究主要集中在菌种选育和接入装有３０ｍＬ发酵培养基的２５０ｍＬ三角瓶中，３６℃、［３－６］构建基因工程菌等方面。本实验室从分离筛选菌种的工１８０ｒ／ｍｉｎ培养４８ｈ。发酵液经４层纱布过滤并离心取上清作入手，自白酒酒醅中筛选到１株产酸性α－淀粉酶的菌株液测定酶活性。Ｃ６，研究了其酶性质，并对菌种特征进行了初步鉴定。［７

6、－８］１．４．３酶活测定参见Ｙｏｏ改良法。1材料与方法１．４．４菌株特征鉴定通过显微镜观察和生理生化试验进［９］行鉴定。１．１菌种１．４．５粗酶液的制备将发酵液８０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清自北大仓酒厂的白酒酒醅中分离筛选到的产酸性α－淀液先用３０％饱和度硫酸铵盐析，离心后取上清液再用６０％饱粉酶的菌株Ｃ６。和度硫酸铵进行二次盐析，离心收集沉淀，用少量的ｐＨ值１．２培养基７畅０（０．１ｍｏＬ／Ｌ）的磷酸缓冲液溶解，经透析后得到粗酶液，（１）分离培养基：含可溶性淀粉１％、蛋白胨０．５％、进行酶性质研究。Ｎａ２ＨＰＯ４０

7、．０１％、ＫＨ２ＰＯ４０．０１５％、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＮａＣｌ０．１％、琼脂１．８％，ｐＨ值４．０～４．５。（２）富集培养基：2结果与分析含可溶性淀粉１．２％、蛋白胨０．８％、酵母粉０．２％、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４０．１％，ｐＨ值５．０。（３）斜面培养基：含２．１菌种筛选可溶性淀粉１．２％、蛋白胨０．８％、酵母粉０．２％、ＭｇＳＯ４·进行分离初筛，从大量菌株中选出了１００株透明圈与菌７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４０．１％、琼脂１畅８％，ｐＨ值７．０。（４）种落直径比大的菌株进行摇

8、瓶发酵（图１），得到了１株产酸性α－淀粉酶活性相对较高且稳定的菌株Ｃ６，酶活性为３８８．５Ｕ／ｍＬ。表１列出了透明圈与菌落直径比值排在前１０收稿日期：２０１３－０５－１４位的菌株的酶活性情况。基金项目：齐齐哈尔大学青年教师科学技术类科研启动支持计划（编号：２０１１Ｋ－Ｍ３５）。２．２菌株特征鉴定作者简介：郭宏文（１９７３—），男，河北深县人，硕