香菇菌丝发酵及胞内多糖提取条件的优化

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1、＜＜＜食品工程·技术CEREALSANDOILSPROCESSING香菇菌丝发酵及胞内多糖提取条件的优化11，21111尹艳丽曹健王卫国黄亮田青罗宇（1．河南工业大学生物工程学院2．中原工学院）【摘要】通过摇瓶培养研究香菇菌丝液体发酵的最适培养条件，通过正交试验探讨香菇菌丝胞内多糖的最佳提取条件和方法。结果表明：最适发酵培养时间为7d，pH值6．5，乳糖2％，硫酸亚铁0．2％，大豆蛋白胨0．6％，所得菌丝体为94．0g／L（湿重）；热水浸提法的最佳条件为：料液比为1∶10，浸提时间4h，浸提温度90℃，多糖含量最高为10．3％；超声波法的最佳提取条件为：超声功率400W，处理时间

2、50min，料液比1∶15，多糖含量最高为12．5％。通过对比，确定超声波法为香菇菌丝多糖的最佳提取方法。【关键词】香菇；胞内多糖；发酵；提取中图分类号：TS244．5文献标识码：A文章编号：1673-7199(2009)12-0167-04香菇是药食两用菌类，作为食用菌，由于其营养心机，上海菲怡尔分析仪器有限公司；SW－CJ－2F型双成分丰富，历来受到人们的喜爱；作为药物，其中所人双面净化工作台，苏州净化设备有限公司；JY92P－含的香菇多糖是其主要的活性成分。1969年，日本科Ⅱ超声波细胞粉碎机，宁波新芝生物科技有限公司。学家Chihara等人在Nature杂志上首次发表了从

3、香菇子1．2方法实体中提取并分离出香菇多糖，研究其在老鼠体内具1．2．1香菇液体发酵培养有抑制肉瘤180活性。此后香菇多糖等食用菌、动植将活化的香菇斜面菌丝块接入液体培养基中培养物多糖就引起了各国科学家的兴趣，各国学者竞相从7d，再以10％的接种量接入发酵培养基中，摇床转速各种生物材料中寻找和提取具有生理活性的多糖物质。为150r／min，温度为28℃，培养7d得发酵液。本文对香菇液态深层发酵进行研究，以期短时间内生1．2．2生物量的测定产大量菌丝体，然后对菌丝体内多糖的提取进行系统以4层纱布过滤发酵液，称菌丝体湿重。研究，获得一种简单可行的提取工艺。1．2．3香菇多糖的提取将发

4、酵液过滤所得菌丝体于65℃左右干燥箱中烘1材料与方法干，用以下方法提取多糖：1．1材料（1）热水浸提法：称取4g香菇菌丝干粉，加入10（1）菌种。香菇（Lentinanedodes），由河南农友生倍体积（w／v）的蒸馏水，于90℃水浴中恒温3h，物科技有限公司提供。4000r／min离心10min，收集上清液，沉淀再重复浸提（2）培养基。斜面培养基（g／L）：土豆200，蔗糖2次，合并3次的上清液，浓缩，醇析，Sevag法除蛋20，琼脂20；液体培养基（g／L）：土豆200，蔗糖20；白，过滤，定容至50mL测多糖含量。发酵培养基（g／L）：土豆200，蔗糖20，大豆蛋白胨（2）

5、超声波法：称取4g香菇菌丝干粉，加入10倍5，MgSO42，pH值自然。体积（w／v）的蒸馏水，超声功率为400W，用超声波（3）试验仪器。HZQ－Q全温震荡器，中国（哈尔处理40min，离心得上清液，浓缩，醇析，Sevag法除滨）东联电子技术开发有限公司；TDL－5A台式高速离蛋白，过滤，定容至50mL测多糖含量。粮油加工2009年第12期167技术·食品工程＞＞＞CEREALSANDOILSPROCESSING1．2．4多糖含量测定物量最高，可见在所选的几种碳源中，可溶性淀粉是多糖＝总糖－还原糖，测定总糖采用苯酚－硫酸法，最佳碳源，所得菌丝体质量为71．6g／L，其次是乳糖和

6、测定还原糖采用3，5－二硝基水杨酸法。葡萄糖，最差是蔗糖，所得菌丝体质量仅为32．0g／L。但在发酵过程中可溶性淀粉一部分被香菇利用，另一2结果与讨论部分被水解为其他糖类，这样会影响多糖的测定结果，2．1菌丝培养条件的确定综合考虑采用乳糖作为最佳碳源较为合适。2．1．1最适培养时间2．1．4最适培养氮源图1培养时间对菌丝体生长的影响图4不同氮源对菌丝体生长的影响菌体的生长经过延缓期、对数期、稳定期和衰亡以乳糖为碳源，选择尿素、硫酸铵、酵母膏和大期4个阶段，由图1可知：前2d为延缓期，3～6d为对豆蛋白胨为香菇发酵培养基的氮源，其他发酵条件不数期，6～8d为稳定期，从9d开始进入衰

7、亡期。香菇真变。由图4可知：以大豆蛋白胨为氮源的培养基中香菌培养7d时生物量最高可达45．0g／L。菇生物量最高，可达82．3g／L，其次是酵母膏和尿素，2．1．2最适培养pH值最差的是硫酸铵，生物量仅有23．5g／L。2．1．5无机盐对菌株产多糖的影响图2起始pH值对菌丝体生长的影响图5不同无机盐对菌丝体生长的影响由图2可知：菌株生长受培养基起始pH值的影响较为显著，菌株在中性偏酸性条件下生长较好，弱碱无机盐可为微生物提供除碳、氮源以外的各种重性条件下生物量急剧下降。香菇真菌在