ELISA试剂盒检测中样品的处理

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1、ELISA试剂盒检测中样品的处理/各种检测样本的处理1．细胞培养物上清：细胞培养物于室温1000g，离心10分钟后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。2．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g，4℃离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8℃,1000g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。4．尿液：无菌收集取初尿，离心除去沉淀物，即可用于检测，要长期保存尿样，可以

2、加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿样冰冻保护液放入-20℃冰箱长期保存。5．组织匀浆：将组织标本先用PBS洗涤，除去多余血液，匀浆化后放在PBS于-20℃放置过夜，再经过二次反复冻融破膜，5000g，4℃离心5分钟，取上清即可检测。ELISA法定量检测人细胞液、体液以及组织匀浆中8羟基脱氧鸟苷的含量。试剂组成:包被平底微孔板,酶结合物,生物素,标准品,显色剂A,显色剂B,终止液,浓缩洗涤液（100倍稀释）,使用说明书自备物品1.酶标仪（尽量提前预热）2.微量加液器、吸头3.蒸馏水或去离子水以及滤纸

3、样本的采集及保存一般的生物标本包括有：血液、体液、内脏器官、粪便、胃液、活检组织、组织提取液、天然孔分泌物及各种表达系统的表达产物等一般为无菌操作，低温保存（-80℃、液氮）一．如果采集的实质器官则要求：1、  器官实质不能太小2、  以采集实质性病灶区为佳：如淋巴结、心脏、非、肺、脾以及肠管等病毒、病菌聚集的地方为佳3、  同一病例装入同一容器，并做好标记4、  应在0-8℃的低温储存和运输5、  实质性器官的处理：5.1、取实质性器官约0.5mg左右，充分剪碎或研磨5.2、加入约500ul的PBS/生理盐水

4、，充分混匀5.3、离心5000rmpx10min，去上清5.4、-20℃保存，作为待检标本（切勿反复冻融）二．体液（常见的包括血清、血浆、唾液以及尿液等）的处理方式1、血液包括血浆和血清，它们的主要区别就是：血清凝血而血浆不凝血，所以它们的处理方式也就不一样1.1、采集血浆时一般不加抗凝剂（主要为枸橼酸盐和柠檬酸盐），采集后立即离心800-1000rmpx5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；1.2、如要采集血清，一般要加入总体积1%的抗凝剂，采集后先室温或4℃静置半小时后，800-1000rmpx5m

5、in分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；2、胃液和唾液的采集方式一般现采现用，但是一般饭后半小时内不易采集，因为刚进食的唾液中富含丰富的唾液淀粉酶，最好的采集的时间时空腹采集；3、尿液的采集方式基本和唾液一样的，即现采现用，但是一般隔夜尿不采集；4、组织提取液如肺泡灌洗液等，采集后离心分离，800-1000rmpx5min，取上清，-20℃或4℃保存备用；三．粪便以及天然孔排泄物：采集后一般现用PBS/生理盐水溶解，充分混匀，800-1000rmpx5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；四．活检组织一

6、般进行穿刺检测，最常见的就是肝活检，像病毒性肝炎、脂肪肝、各种类型的肝硬化等进行活检简单方便、准确。三、表达产物的检测（一）真核表达产物1、  细胞上清（分泌性蛋白）1.2、贴壁细胞或半贴壁，直接将细胞培养上清吸出，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；1.2、不贴壁细胞，将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmpx10min，吸取上清至另一10ml离心管中，10000rmpx10min，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有

7、需要可进行透析或纯化处理；2、  细胞裂解物（非分泌性蛋白）2.1、贴壁细胞或半贴壁，直接将细胞培养上清吸出，然后用001MPBS（pH7.4）将细胞吹下至10ml离心管，500-800rmpx10min，弃上清，沉淀转移至1.5ml离心管中，DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；2.2、不贴壁细胞，将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmpx10min，弃上清，沉淀移至另一10ml离

8、心管中，0.01MPBS（pH7.4）重悬，500-800rmpx10min，弃上清，沉淀移至1.5ml离心管中，DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；（二）原核（大肠杆菌表达系统）表达产物1、表达上清（非融合性蛋白）直接将培养物和上清吸出，10000rmpx10min，取