石斛兰的组织培养

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1、植物组织培养课程论文石斛兰的组织培养作者：杨恩富专业：设施农业技术班级：设农08-1班学号：33号指导教师：陈霞[摘要]：运用组织培养相关知识，对石斛兰做了简单的组织培养阐述。大致方向为：（一）培养目的——通过石斛兰的组织培养，加强我对石斛兰的了解以及石斛兰在组织培养中所注意的事项，同时为学习组织培养这门课程打下坚实的基础；（二）培养方法——选择石斛兰的叶片、茎段腋芽、根系在营养基中进行组织培养；（三）简单介绍石斛兰生根培养和炼苗技术。通过本篇论文，加强自身对石斛兰的了解，并对其生理特性有一定的认

2、知。组织培养技术，用组织培养法繁殖植物，这是组织培养应用于生产的主要的和成效最大的实例。所以，石斛兰的组织培养，更加肯定了组培价值所向。关键词：石斛兰组织培养炼苗一、石斛兰(Dendrobium)的概述石斛兰(Dendrobium)属兰科多年生附生落叶或常绿草本植物，原产中国、日本及澳大利亚等国家，是一种观赏价值很高的花卉，其花姿态优美，花色艳丽多彩，花多而且花期长，深受人们喜爱。石斛兰有600种原生种，连混合交配种在内约有7000种。从形态上可分节生种和蝴蝶兰花形种两大类。在繁殖上，因为几乎所有

3、的观赏类石斛都是杂种，通过种子播种不能得到大量与亲代形状一致的植株。目前石斛兰主要采用分株繁殖，繁殖速度缓慢。我国从20世纪70年代中期开始，对石斛的组织培养进行了大量研究，进展很快。但目前石斛兰的组织培养采用的外植体基本上都是茎尖、新生芽，由于每株植株体上这些材料有限，所以茎尖、新生芽作为外植体材料的组织快繁在生产上应用难度较大。虽然通过叶片诱导能够诱导出类原球茎，如Sagwa等采用幼茎的侧芽和顶尖的分生组织分化出类原球茎。但由于石斛兰类原球茎的诱导机理没有研究清楚，通过类原球茎分化完整植株的途

4、径还有很大的难度。二、外植体的选择无菌外植体的获得:从无病虫害的母株上选择健壮、叶片未展开的幼芽，用已消毒的刀片切取4～12cm，并将外围叶片剥除,仅留顶端O–3cm叶鞘，放入锥形瓶中，用纱布封闭瓶口，自来水流水冲洗30min，然后用70％酒精消毒1min，1‰HgCl，处理8min,最后用无菌水洗4～5次,将外植体置入无菌烧杯,切取的芽体直径约1.2cm、高2.0～5.0cm，呈锥螺状，具顶芽1个、腋芽3～4个(每层各有1个)。将芽体用0.1％升汞溶液浸泡10min、无菌水冲洗3～5次后、切除叶

5、鞘。然后将顶芽与腋芽分开，取从下往上数第2～3个腋芽作外植体(第1个腋芽较难消毒，第4植物组织培养课程论文4个芽易成苗、较难诱导出原球茎),备用。三、石斛兰各组织诱导石斛兰叶片愈伤组织的诱导、石斛兰茎段腋芽的诱导、石斛兰根系的诱导。（一）石斛兰叶片愈伤组织的诱导1.叶片愈伤组织诱导培养基叶片愈伤组织诱导培养基以MS为基本培养基，根据生长调节剂的组成、浓度设5个处理。处理A：MS+2，4-D5.0mg/L;处理B:MS+2,4-D5.0mg/L+6-BA1.0mg/L;处理C:MS+2,4-D5.0

6、mg/L+6-BA3.0mgL;处理D,MS+2,4-D3.0mg/L+6-BA1.0mg/L；处理E，MS+2，4-D3.0mg／L。5种叶片愈伤组织诱导培养基中均附加琼脂6dE，蔗糖2OL，活性炭3L，pH值为5.4～5.8。2.叶片愈伤组织切块大小将无菌的幼嫩叶片,用解剖刀切成1cm×1cm的小块,接种在诱导培养基上。3.培养条件温度为25℃，日光照12h，光照强度2000LX。（二）石斛兰茎段腋芽的诱导诱芽培养基以MS为基本培养基，根据生长调节剂的种类和浓度设3个处理：1.MS+6-BA

7、4.0mg/L+NAA1.0mg/L；2.MS+6-BA4.0mg/L+NAA/1.0mg/L+KT1.0mg/L；3.MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+CH1.0mg/L。取无菌茎段，将两端用无菌解剖刀轻轻削去2～3nl/n，将其接种到诱芽培养基上。（三）石斛兰根系的诱导设3个不同的改良的1/2MS培养基处理。处理1:1/2MS+IBA2.0mg/L；处理2:1/2MS+IBA2.0mg/L+肌醇2.0mg/L；处理3:1/2MS+IBA2．0mg／L+香蕉汁10％。培养基中内

8、含物同“1.2.2”。选取生长健壮、高2cm'4上的单个芽体分别接人培养基中进行石斛兰根系的诱导。四、石斛兰生根培养将诱导出的丛生芽单个分开，可采用以下2种方法将其接种于生根培养基中：一步法：于500mL兰花瓶中注入MS+花宝1号3g/L+1.7％苹果+1.7％香蕉+1.7％马铃薯的培养基150mL,接人20株根茎叶分化较完全、株型整齐的健壮小苗。4植物组织培养课程论文接种后将瓶苗置于温度f27±2)℃、光照强度100O～2000lx(每天连续光照10h)、加设水帘风机系统的环境下