兽医微生物学实习

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1、实习报告学院:动物医学院课程:兽医微生物实习班级:动物医学82班学号:1718203姓名:王广操指导教师:于勇职称:实验师实习时间2010年6月7日至2010年6月12日实习地点逸夫楼微生物教学实验室40482010年6月13日南京农业大学教务处制7实习报告一、目的要求1．了解大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）形态与染色特性以及主要培养特性；2．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）常规微生物学诊断法；3．掌握大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）生化试验的方法和原理；4．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）在选择性和鉴别培养基上的生长表现；二、实验材料1.菌种：大肠杆菌和沙门氏菌混合液，产气肠杆菌

2、和变形杆菌混合液2.培养基：半固体培养基S·S平板麦康凯平板三糖铁高层斜面蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水3.革兰式染色试剂：草酸铵结晶紫溶液、革兰氏碘溶液、95%酒精，沙黄水溶液4.生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、枸橼酸盐、H2S、尿素5.生化试剂：吲哚试剂，MR、VP试剂三、实验内容及其安排（一）、配培养基：S.S、麦康凯、半固体、三糖铁高层斜面、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水。（二）、细菌分离培养：将大肠杆菌、沙门氏菌混合肉汤，产气、变形混合肉汤分别接种麦康凯、S·S平板，染色镜检（三）、挑取麦康凯和S·S平板上单一菌落做染色、镜检，挑单一菌落接种三糖铁斜面(涂布、穿刺)（四）、观察三糖

3、铁中细菌生长情况。并挑取三糖铁斜面上的细菌分别接种蛋胨水、葡胨水、半固体、微量生化管，37℃培养48h。（五）、观察结果。第一天、配培养基（自由分组，5人/组）第一组S.S培养基：50gS·S培养基+800ml蒸馏水，煮沸溶化浇平板（15ml/块平板），无需高压第二组麦康凯培养基：44g麦康凯培养基+800ml蒸馏水+1.6g琼脂粉，煮沸，高压15磅，15分钟，浇平板第三组三糖铁琼脂：30.5g三糖铁琼脂+500ml蒸馏水，煮沸溶化，装长试管50根（10ml/管），高压15磅，15分钟，做高层斜面第四组葡萄糖蛋白胨水：1.25g蛋白胨+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氢二钾+250ml水，

4、加热溶解，调pH至7.6，分装40根短试管高压（3指半高，7约5-8ml）第五组蛋白胨水：1.25g蛋白胨+0.625gNaCl+125ml水，调pH至7.6，分装40根短试管，捆扎，高压，121℃15分钟　（2指高，约2-4ml）第六组半固体：分别称取蛋白胨5g、牛肉膏2.5g、氯化钠2.5g、磷酸氢二钾0.5g、蒸馏水500ml，加热溶解，调pH7.6，过滤称琼脂粉2g+肉汤500ml,煮沸，待琼脂粉完全溶化，分装短试管（2指高，约2-4ml）第二天、分离培养1.在麦康凯平板和S·S平板上接种待检材料（大、沙混合菌液;产气、变形混合菌液）2.置37℃恒温培养箱内培养24小时3.观察每种

5、平板上细菌的生长情况4.比较单个菌落的形态：染色镜检SS琼脂强选择性培养基1.培养基中的煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、柠檬酸钠抑制非肠道菌生长2.不能发酵乳糖的细菌，菌落橘黄色3.分解乳糖的细菌产酸，使胆盐呈胆酸析出，形成中心混浊的深红色菌落4.柠檬酸铁使产生硫化氢的菌落中心呈黑色5.硫代硫酸具有缓和胆盐对细菌的有害作用及煌绿、中性红的毒性作用。麦康凯培养基1.用于肠道菌的分离与鉴定2.能分解乳糖的细菌--菌落红色3.不能分解乳糖的细菌—菌落灰白色第三天观察结果接种三糖铁1.观察麦康凯、S.S平板上细菌生长情况．可看到几种菌落，是否圆形光滑凸起透明的菌落实验结果：（1）SS琼脂强选择性培养基：有

6、橘黄色圆形凸起中心为黑色的菌落，橘黄色为变形杆菌，黑色为产气杆菌。（2）麦康凯培养基：呈红色圆形凸起菌落和呈灰白色圆形凸起的菌落。其中红色菌落为产气杆菌，灰白色菌落为变形杆菌。（3）镜鉴结果：革兰氏阴性杆菌。2.挑取单个的细小透明菌落或者红色菌落的一半作革兰氏染色，镜检，另一半菌落接种三糖铁培养基（接种时，先涂布斜面，后穿刺底层）、接种蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、半固体73.37℃恒温培养24-48h。三糖铁琼脂1.用于测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵作用及能否产生硫化氢2.能发酵乳糖、蔗糖培养基呈黄色3.发酵葡萄糖不发酵乳糖、蔗糖底层呈黄色、斜面部分为红色(少量酸接触空气而氧化细菌生长利

7、用含氮物质,生成碱性化合物)4.能产生硫化氢培养基呈黑色5.能产气的细菌底层琼脂内有气泡第四天观察结果做生化试验1.观察细菌在三糖铁斜面/底部的生长情况：是否产酸产气，培养基是否变红。实验结果：（1）三糖铁斜面变红，底层呈黄色，培养基呈黑色，底层琼脂内有气泡。即细菌能发酵葡萄糖不发酵乳糖、蔗糖并能产生硫化氢和气体。（2）半固体培养基穿刺线周围培养基变混浊。即细菌有运动能力，可由穿刺线向四周扩散生长。2.挑取三糖铁斜面上的