高效液相色谱实验II

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1、高效液相色谱实验II固相萃取水样中的多核芳烃并以内标法测定其含量【目的】（1）学习固相萃取法处理样品；（2）用内标法定量。【原理】固相萃取法是色谱法的一个重要的应用。在此方法中，使一定体积的样品溶液通过装有固体吸附剂的小柱，样品中与吸附剂有强作用的组分被完全吸附；然后，用强洗脱溶剂将被吸附的组分洗脱出来，定容成小体积被测样品溶液。使用固相萃取法，可以使样品中的组分得到浓缩，同时可初步除去对感兴趣组分有干扰的成分，从而提高了分析的灵敏度。固相萃取不仅可用于色谱分析中的样品预处理，而且可用于红外光谱、质谱、核磁共振、紫外和原子吸收等各种分析方法的样品预处理。C1

2、8固相萃取小柱具有疏水作用，对非极性的组分有吸附作用，因此可以从水中将多核芳烃萃取出来，完成浓缩样品的作用。固相萃取小柱还有其他类型，如极性、离子交换等。   内标法的原理是，设在VmL样品中含有Wig待测组分i，加入WSg内标物S，混匀后进样，得组分i及内标物S的峰面积分别为Ai及AS。由于峰面积正比于通过检测器的物质量，所以有：Wi=fiAiWS=fSAS式中fi、fS分别为组分i和内标S的校正因子。两式相除，得　所以，组分i的体积浓度为：　　fi’可用已知被测物i和内标物浓度的样品进样分析得到。内标法是一种相对测量方法，因此，进样量不必准确，操作条件稍

3、有变化对结果没有什么影响。【仪器和试剂】Waters510高效液相色谱仪（由Waters510高压输液泵，Rheodyne7725i进样器和440检测器组成）色谱柱：5cm×4.6mmI.D.,YWG-C18H37 (ODS)，10μm流动相：甲醇－水(80+20)         流速：1.0mL·min－1检测波长：254nmC18固相萃取小柱：2支25mL移液管：1支50mL医用注射器：1支10mL医用注射器：2支2mL容量瓶：2个样品I：内标标准样，含萘(0.010mg·mL－1)、联苯(0.010mg·mL－1)、  菲（0.006mg·mL－1）

4、的甲醇溶液。样品II：内标物溶液。含联苯（0.10mg·mL－1）的甲醇溶液。样品III：含萘、菲的被测水样。【实验内容】（1）固相萃取小柱预处理：用10mL注射器将2mL甲醇压过小柱，再将2mL纯水压过小柱。（2）用移液管取25mL水样，用50mL注射器压过小柱，这时水样中的萘和菲被吸附在小柱上。在小柱下端承接一2mL的容量瓶，将约1.5mL甲醇用10mL注射器压过小柱到容量瓶中，加入一定量内标联苯溶液，定容摇匀，得到浓缩的样品。（3）按“实验I”中的步骤，进样分析内标标准样和浓缩样品各三次。（4）取平均结果，计算峰面积As和Ai；根据内标标准样的浓度计算

5、fi’，再计算出浓缩样品中的萘和菲的浓度，进而计算出原水样中的浓度（mg·mL－1）。思考题1.       内标法与外标法各有哪些特点？本实验为什么采用内标法为好？2.为什么要对色谱分析中的样品进行预处理？简单列出三个以上的原因。