微生物的实验室培养(新课)

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1、课题1微生物的实验室培养专题2:微生物的培养与应用一、培养基作用、种类二、无菌技术三、制备牛肉膏蛋白胨培养基四、纯化大肠杆菌主要内容一、培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基。一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等培养基的基本成分：除了主要营养物质之外，培养基的还有其他的要求：举例？C液体培养基：（一般用锥形瓶盛装）固体培养基：（一般用试管或培养皿盛装，在液体培养基的基础上再添加琼脂。）培养基的种类1、按物理状态分：2、按成分来分，可分为天然培养基和合

2、成培养基。二.无菌技术思考：1.什么是无菌技术？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）3.消毒和灭菌概念，有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防止杂菌污染的方法。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。3.常用的消毒方法：煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法常用的灭菌方法：灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌：100kPa121℃15-30min判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适

3、方法。（1）豆浆（2）游泳池（3）超净工作台（4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶（5）培养细菌用的培养皿（6）无菌水（7）牛肉膏蛋白胨培养基（8）接种环、接种针（9）实验操作者的双手牛奶接种室、接种箱或超净工作台接种工具，接种环、接种针或其他金属用具玻璃器皿（吸管、培养皿）接种环接种针（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL2.称量准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称

4、后及时盖上瓶盖。三、实验操作3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至100mL。4.灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板。倒平板操作的讨论1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？用手触

5、摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养

6、微生物。（二）纯化大肠杆菌微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。1.平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧

7、接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后仍然要灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。平板划线法的讨论2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的

8、末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。系列稀释操作101102103104105106(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。(2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中，