ELISA及相关免疫分析技术

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1、ELISA及相关免疫分析技术江苏省临床检验中心许斌8/31/2021JSCCLXUBIN概述ELISA是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做半定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。8/31/2021JSCCLXUBINELISA1971年Engvall等人把免疫组化

2、的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA（EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay）技术，酶联免疫吸附剂试验。特点：在聚苯乙烯固相载体表面组装免疫活性物质形成“免疫吸附剂”酶标记免疫活性物质，化学显色剂进行信号放大；有二步温育反应二次洗涤过程；灵敏度、特异性相对较高。8/31/2021JSCCLXUBINELISA原理双抗体（原）夹心法检测抗原（体）的常见方法，应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原（适用于二价以上抗原,不能测小分子半抗原）。8

3、/31/2021JSCCLXUBIN间接法检测抗体的方法，利用酶标记的抗抗体（一般为抗人IgG）检测已与固相抗原结合的抗体，因有干扰须稀释标本。固相包被抗原待测抗体酶标记第二抗体底物8/31/2021JSCCLXUBIN竞争法检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。固相包被抗原待测抗体酶标记特异抗体底物8/31/2021JSCCLXUBINELISA原理竞争中和法以测抗体为例，包被抗

4、体、待测抗体竞争结合加入的恒定量的中和抗原，酶标记抗抗体（抗人IgG），待测抗体量越多包被抗体结合越少，显色越浅。捕获法一般用于检测IgM抗体，包被抗人μ链，捕获血清中的所有IgM抗体，加入定量特异抗原与捕获的特异抗体结合，酶标记特异抗体（或抗抗体）显色。8/31/2021JSCCLXUBINELISA捕获法原理图固相包被抗μ链抗体捕获的IgM抗体酶标记抗原底物8/31/2021JSCCLXUBIN试剂盒选择卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格

5、，并贴有防伪标签的产品，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。灵敏度：有二层含义，1）为试剂检出被检物质的最低量的能力；2）为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性越少越好），取决于包被物的全面性。特异性：指试剂正确检定不存在的被检物质的能力（无假阳性），取决于包被抗原（体）及标记抗原（体）的纯度及特异性。精密度：ELISA试剂一般指其批内CV，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围8/31/2021JSCCLXUBINCLSII/LA23-AAsses

6、singthequalityofimmunoassaysystems:radiooimmunoassaysandenzyme,fluorescence,andluminescenceimmunoassays;approvedguideline11.2:Thelowerimmunochemicaldetectionlimitforanassayrepresentsthelowestlevelofanananlytethatcanbereproduciblydetected.thelaboratoryorte

7、stsensitivityisidenticaltothedetectionlimit;usecutoffvalueClinical(diagnostic)sensitivity:theproportionofpatientswithawell-definedclinicaldisorderwhosetestvaluesarepositiveorexceedadefineddecisionlimit(i.e.,apositiveresultandidentificationofthepatientswho

8、haveadisease);usepositivepredictivevalue,false-negativeresults,et.al.8/31/2021JSCCLXUBIN8/31/2021JSCCLXUBIN8/31/2021JSCCLXUBIN8/31/2021JSCCLXUBIN8/31/2021JSCCLXUBIN8/31/2021JSCCLXUBINHBV基因型和血清学亚型以HBsAg的抗原决定族分血清学亚型共同