色谱柱使用及维护

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1、色谱柱的使用与维护实验室常用色谱柱：C8柱、C18柱、氰基柱、苯基柱、氨基柱、手性柱、离子交换柱不同色谱柱的选择依据色谱柱的结构良好的色谱柱使用习惯及维护建立方法时应注意的事项色谱柱失效的特征指示色谱柱类型分离原理备注常规RP柱相似相容常规NP柱相似相容离子交换色谱柱溶质离子与树脂交换中心离子相互作用强度的差异流动相的pH、离子强度手性色谱柱引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异一般以疏水作用和空间作用为主一般色谱柱选择的依据：以反相色谱为例：当被两种以上的分析物的疏水性存在较大差异时，选择一般的C8/C18即可；当被分析物疏水性相差无几

2、，但氢键作用相差较大时，可选用氰基柱、氨基柱；苯基柱对含有不同芳环的芳香化合物具有较好的分离能力；对离子性化合物，可采用离子交换柱或者离子对反相色谱柱不锈钢柱管：可用于所有的有机溶剂与大多数水性缓冲液，然而含氯的流动相会缓慢地“卤素腐蚀”不锈钢柱管，尤其是低pH条件下柱管不锈钢成分（铁、镍、铬）牢固络合的样品可能发生这类问题，但因为色谱柱内壁的表面积很小，发生不良反应的机会不大色谱柱的结构多孔烧结物（滤片）：封闭色谱柱的两端，固体色谱柱的填料一般来说，5um与3um的微粒分别用2um与0.5um孔径的不锈钢滤片发生不良反应的可能比色谱柱内壁大得

3、多峰型不好与样品回收率低可能预示滤片出现问题压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封柱填料：色谱柱担体，常用的填料为硅胶、多孔聚合物、氧化铝等优点优良的物理特性可控的成熟工艺理想的表面活性优良的溶剂兼容性（不存在不溶胀）硅胶填料的特性缺点在高pH条件下，硅胶溶解良好的色谱柱使用习惯使用前的准备工作阅读使用说明书（特别注意使用事项、pH范围、保存条件）→按要求活化色谱柱→测定柱效，记录色谱柱参数信息→流动相平

4、衡色谱柱进样建议：建立色谱柱信息台账（项目所属的色谱柱的柱压、拖尾因子、分离度、进样时间），定期对色谱柱进行柱效的测定建议：色谱柱项目专用----频换的更换流动相很容易降低色谱柱的寿命，并容易造成试验保留值的漂移正确的pH使用范围禁止在色谱柱pH范围之外使用禁止长时间在色谱柱的pH临界处使用实例各相之间良好的互溶性正确的流动相组成适宜的pH范围正确的保存色谱柱不存在缓冲盐或离子对试剂反相----90%以上的有机相中正相---不含水的纯有机溶剂中塑料堵头拧紧干净的样品准确检测保护色谱仪保护色谱柱日常维护色谱柱的维护特殊维护日常维护：每次分析结束后

5、色谱柱的清洗反冲不同厂家不一致：月旭----正向使用，反向冲洗Agilent----优先正向，最后反冲Phenomenex----反冲迪马-----反冲特殊维护----色谱柱出现异常的维护柱压升高柱效降低色谱柱常见的异常柱压升高固体颗粒物堵塞、柱坍塌盐析出柱效降低固定相流失强保留物质的积累柱压高---建议：a)将水通道与缓冲盐定期进行清洗；b)密封垫与转子磨损造成的微粒是堵塞色谱柱滤片的主要来源，定期更换泵密封垫与进样阀转子一般能减少滤片的堵塞；c)在开发分析方法时注意缓冲盐与有机相的互溶性，尤其是在梯度洗脱;d)接保护柱固定相流失的原因：硅胶

6、基质的流失---高水、高温、高pH键合相的流失----低pH、高水建议：流动相pH、水相限制在色谱柱的使用范围内强保留物质的积累：导致色谱峰拖尾，展宽建议的解决方法：不同厂家色谱柱不一致。详见各厂家建议的色谱柱冲洗程序。前延峰拖尾峰裂缝或分叉峰胖头峰或馒头峰保留时间波动较大常见的色谱峰异常问题及解决方案前延峰可能原因：a)填料丢失，多见于酸性物质，换柱b)溶剂效应，采用流动相溶解样品解决方法：换柱采用流动相溶解增加缓冲盐的浓度，抑制次保留效应提高柱温，加快传质速率拖尾峰可能原因：样品过载次保留效应，尤其是碱性物质填料中残留的痕量金属离子流动相试

7、剂中的金属离子不合适的缓冲盐溶液解决方案：降低进样量加入扫尾剂（酸---1%乙酸；碱----10mmol/ml三乙胺，三乙胺无效，可改为EDTA）尽量采用色谱级试剂增加缓冲盐的浓度产生次保留效应的因素--离子交换效应离子交换效应：质子化的碱性分子与离子化的硅羟基发生离子交换产生次级保留效应产生次保留效应的因素—痕量金属离子金属离子所产生的强吸附位比硅羟基强50倍！！更易引起碱性物质的拖尾严重拖尾-----强保留组分严重拖尾峰的出现往往是强保留污染物在柱头进口处聚集的信号！！！峰分叉可能原因：柱填料坍塌柱过载色谱柱中存在“空穴”（使用中避免撞击）

8、解决方案：更换色谱柱降低进样量宽峰或馒头峰可能原因：色谱柱方面：1、柱填料坍塌；2、色谱柱或保护柱被污染；3、过载流动相方面：流速过低、缓冲盐浓度、流