《共聚焦细胞》PPT课件

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1、激光扫描共聚焦显微镜吴旭2009.10.20高级显微镜原理正置、倒置显微镜细胞遗传工作站活细胞工作站激光显微分离系统激光共聚焦显微镜概述激光扫描共聚焦显微镜（Laserscanningconfocalmicroscope，LSCM）生物医学领域的主要应用通过一种或者多种荧光探针标记后，可对固定的组织或活体样本进行亚细胞水平结构功能研究高空间分辨率、非介入无损伤连续光学切片、三维图像、实时动态等细胞结构和功能的分析检测……ConventionalfluorescencemicroscopeConfocalmicroscope光镜2um0.

2、02~0.2um电镜0.1nm历史1957年，MarvinMinsky提出了共聚焦显微镜技术的某些基本原理，获得了美国的专利。1967年，Egger和Petran成功地应用共聚焦显微镜产生了一个光学横断面。1977年，Sheppard和Wilson首次描述了光与被照明物体的原子之间的非线性关系和激光扫描器的拉曼光谱学。1984年，Biorad为公司推出了世界第一台商品化的共聚焦显微镜，型号为SOM-100，扫描方式为台阶式扫描。1986年MRC-500型改进为光束扫描，用作生物荧光显微镜的共聚焦系统。Confocalmicroscopy

3、comesofageJGWhite&WBAmos.Nature328,183-184(09July1987)Zeiss、Leica、Olympus、NikonZeissLSM510激光扫描共聚焦显微镜ZeissLSM510META激光扫描共聚焦显微镜ZeissLSM510META激光扫描共聚焦显微镜NikonA1R激光扫描共聚焦显微镜PrairieUltimaIV活体双光子显微镜国家光电实验室（武汉）自制随机定位双光子显微镜LeicaTCSSP5激光共聚焦扫描显微镜基本原理相差、DIC常用荧光标记共聚焦原理Twowaystoobtain

4、contrastinlightmicroscopy.Thestainedportionsofthecellin(A)reducetheamplitudeoflightwavesofparticularwavelengthspassingthroughthem.Acoloredimageofthecellistherebyobtainedthatisvisibleintheordinaryway.Lightpassingthroughtheunstained,livingcell(B)undergoesverylittlechangein

5、amplitude,andthestructuraldetailscannotbeseeneveniftheimageishighlymagnified.Thephaseofthelight,however,isalteredbyitspassagethroughthecell,andsmallphasedifferencescanbemadevisiblebyexploitinginterferenceeffectsusingaphase-contrastoradifferential-interference-contrastmic

6、roscope.D.Phase-contrastoradifferential-interference-contrastmicroscopeFourtypesoflightmicroscopy.(A)Theimageofafibroblastincultureobtainedbythesimpletransmissionoflightthroughthecell,atechniqueknownasbright-fieldmicroscopy.Theotherimageswereobtainedbytechniquesdiscussed

7、inthetext:(B)phase-contrastmicroscopy,(C)Nomarskidifferential-interference-contrastmicroscopy,and(D)dark-fieldmicroscopy.VisiblelightdetectorSpecimenObjective1stWollastonPrism起偏器DIC检偏器2ndWollastonPrismAnalyzerLightpathDifferentialInterferenceContrast(DIC)(Nomarski)微分干涉是利

8、用特制的棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等，光束分别在距离很近的两点上通过被检物体，在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小，而不出现重影现象，使图象呈现出立体的三维感觉常用荧光探针P