重组技术的基本工具

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1、乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷)转鱼抗寒基因的番茄专题１：基因工程基因工程：基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工，因此叫做DNA的重组技术。注：基因工程能定向改造生物的遗传性状基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程实质（原理）结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达(人工）基因重组转基因抗虫棉抗虫棉普通棉基因工程培育抗虫棉的简要过程：普通

2、棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因与运载体DNA拼接导入棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？基因工程培育抗虫棉的关键步骤：关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来关键步骤二：抗虫基因与运载体DNA连接关键步骤三：抗虫基因导入受体(棉花)细胞1.1DNA重组技术的基本工具：1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”2、DNA连接酶——“分子缝合针”3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”1、限制性核酸内切酶2特点：识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，在特定的位点切割（特异性）。1分布：主要在原核生物中限制酶所识别

3、的序列有什么特点？限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。限制酶识别序列的中轴线3结果：打开磷酸二酯键，产生黏性末端或平末端。磷酸二酯键G1234512345A什么叫黏性末端？当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。EcoRⅠ什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。1.黏性末端和平末端都由限制酶进行切割产生，下列说法正

4、确的是（）A.切割这两种末端可以用同一种限制酶B.切割这两种末端需不同的限制酶C.这两种末端可以相互拼接D.拼接时，限制酶参与拼接过程B如果把两种不同来源的DNA的用同一种限制酶（如EcoRⅠ）来切割，会怎样呢？会产生互补的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。二、“分子缝合针”——DNA连接酶1、种类：2、作用部位：E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶磷酸二酯键DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC

5、…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同来源的DNA片段混合将不同种来源的DNA片段连接起来生物A基因片段生物B基因片段……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……酶切P6寻根问底：DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？DNA连接酶与DNA聚合酶DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链连接部位模板结果双链单链DNA片段间形成磷酸二酯键单个核苷酸与DNA片段间形成磷酸二酯键不需要模板需要模板将DNA片段连接成重组DNA分子合成新的DNA分子2.关于DNA连

6、接酶的叙述正确的是（）A.DNA连接酶将单个核苷酸连接到DNA片段上B.DNA连接酶将两条单链DNA连接起来C.DNA连接酶可形成磷酸二酯键D.DNA连接酶与DNA聚合酶作用相同C要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。三、“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体⒈载体需要的条件：⑴有一个至多个限制酶切点（每种酶的切点最好只有一个），以连接外源基因⑵对受体细胞无害⑶具有自我复制能力或整合到染色体的DNA上，随染色体DNA进行同步复制⑷有某些标记基因，便于筛选⒉运载体的种类：⑴细菌

7、的质粒(plasmid)⑵λ噬菌体衍生物或某些动植物病毒⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？⑵霍乱菌的质粒有多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？质粒是最常用的运载体之一，真正用于基因工程的质粒都是在天然质粒基础上人工改造而成的。能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。3.下列有关基因工程的叙述，正确的是（）A.重组DNA技术所用的工具酶是限制性核酸内