《双向电泳》PPT课件

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1、第七节双向电泳定义：将样品进行电泳后，为了不同的目的在它的垂直方向再进行一次电泳的方法。双向电泳的种类：第一向等电聚焦，第二向SDS电泳第一向SDS电泳，第二向等电聚焦。常用的双向电泳为第一向等电聚焦，第二向SDS电泳。第一向：等电聚焦载体两性电解质PH梯度固相PH梯度（IPG）：固相pH梯度为拥有CH2=CH-CO-NH-R结构的8种丙烯酰胺衍生物系列，其中R包含羧基或叔氨基团，它们构成了分布在pH3~10不同值的缓冲体系。不产生阴极漂移、PH梯度稳定、分辨率高、重复性好。第二向：SDS-PA

2、GE同普通SDS-PAGE类似。一般在垂直电泳系统中无需浓缩胶，因为在IPG胶条中蛋白质区域已得到浓缩，可以认为非限制性IEF胶（低浓度丙烯酰胺胶）充当了浓缩胶。双向电泳在在制药工程中的应用药物及药物靶点的识别疾病标记蛋白的识别药物毒理学研究药物合成过程中相关酶系的研究蛋白质间的相互作用IPG胶条的蛋白质大约载样量IPGStriplengthAnalyticalLoad(silverstaining)PreparativeLoad(Coomstaining)7cm10~100g/125l200

3、~500ug/125l11cm50~200g/185l250~1000ug/185l17cm100~300g/300l1~3mg/300lIPGIEF中pH梯度的选择常用方法：先宽后窄先线性后非线性先短后长凝胶的图像处理分析和典型流程凝胶图像的扫描：图像加工：斑点检测和定量：凝胶配比：数据分析：数据呈递和解释：2-DE数据库的建立：LCM-DIGE(cy3-Lgreen,cy5-Kred)AE6Cy3BE6+SARSCy5CE6Cy5E6+SARSCy3复习题1.影响电泳分离效果的主

4、要因素有哪些，分别是如何影响的?2.SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理?测试题1.抗原与抗体反应具有_______、_______、________及_______等性。2.对于某一抗体而言，其质量衡量指标主要有_______、_______和________。3.免疫分析法利用______________反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物等）的方法。4.RIA是以放射性核素标记_______，使标本中_______与试剂中_______竞争结合_______，通过测定结合相的放射性

5、强度，推定标本含量。5.生物素-亲和素系统中的ABC复合物是指___________。6.聚丙烯酰胺凝胶制备时，聚合反应所使用的化学催化剂是_________，光聚合催化剂是____________。7.带电粒子在电场中移动速度主要决定于___、___和___。8.电渗是指_____________。