《实验革兰氏染色法》PPT课件

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1、实验四革兰氏染色法目的要求学习并掌握革兰氏染色法。了解革兰氏染色原理。巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术。菌种参考菌：金黄色葡萄球菌(G+),大肠杆菌(G-)待测菌：蜡样芽孢杆菌、蓝细菌(微囊藻)仪器显微镜材料载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸等试剂草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、0.5%番红染色液制片初染媒染脱色复染镜检主要操作步骤制片要用活跃生长期的培养物进行革兰氏染色;注意练习无菌操作；在载玻片上滴一小滴生理盐水；取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可；菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。涂片—干燥—固

2、定初染将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。媒染滴加碘液冲去水迹，再染1-2min，水洗。脱色滴加95%乙醇，脱色20-30s立即水洗，以终止脱色。复染滴加番红，染色2-3min，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。干燥后，置显微镜下观察。被染成蓝紫色者即为革兰氏阳性菌(G)被染成红色者是革兰氏阴性菌(G-)革兰氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较成分占细胞壁干重的%革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌肽聚糖含量很高（50-90）含量很低（~10）磷壁酸含量较高（<50）无类脂质一般无（<2）含量较高（~20）蛋白质

3、无含量较高G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层失水、孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，即结晶紫的蓝紫色。作业结果简述4种细菌的染色结果（形态、颜色、革兰氏染色结果）思考题84页，思考题1、2、4