《微生物培养法概论》PPT课件

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1、微生物学第四节微生物培养法概论一个良好的微生物培养装置的基本条件是：按微生物的生长规律进行科学的设计，能在提供丰富而均匀营养物质的基础上，保证微生物获得适宜的温度和良好通气条件（只有少数厌氧菌例外），此外，还要为微生物提供一个适宜的物理化学条件和严防杂菌的污染等。微生物的培养方法可分为八个大类实验室的微生物培养法好氧培养法厌氧培养法好氧菌液体培养法好氧菌固体培养法厌氧菌固体培养法厌氧菌液体培养法试管液体培养浅层液体培养摇瓶培养台式发酵罐高层琼脂柱法厌氧培养皿法厌氧罐技术厌氧手套箱技术亨盖特滚管技术试管斜面、平板茄子瓶、曲盘一、实验室培养法（一）固体培养法1.好氧菌的固体培养试管斜面（tes

2、t-tubeslant）培养皿琼脂平板（agarplate）克氏扁瓶（kolleflask）茄子瓶2.厌氧菌的固体培养实验室中培养厌氧菌特殊的培养装置或器皿配制特殊的培养基六种营养要素加入还原剂和氧化还原势的指示剂（4）厌氧罐（anaerobicjar）（1）高层琼脂柱（2）厌氧培养皿（3）亨盖特滚管技术（hungateroll-tubetechnique）（5）厌氧手套箱（anaerobicglovebox）厌氧菌固体培养的具体方法大多数微生物都是好氧菌，微生物一般只能利用溶于水中的氧，要保证在培养液中始终有较高的溶解氧浓度。（二）液体培养法1.好氧菌的液体培养一般情况下（1大气压，20

3、℃）下，氧在水中的溶解度仅为6.2ml／L（0.28mmol），这些氧只能保证氧化8.3mg（即0.046mmol）葡萄糖，仅相当培养基中常用葡萄糖浓度的1‰。氧的供应始终是好氧菌生长、繁殖中的限制因子。一般可通过增加液体与氧的接触面积或提高氧分压来提高溶氧速率，具体措施有：①浅层液体静止培养；②将三角瓶内培养物利用往复式或旋转式摇床（shaker）作摇瓶培养（shake-flaskcultivation）；③在深层液体培养器的底部通入加压空气，并用气体分布器使其产生均匀、密集的微小气泡；④对培养液进行机械搅拌，并在培养器的壁上设置阻挡装置等。（4）台式发酵罐（benchtopfermen

4、tor）（1）试管液体培养（2）三角瓶浅层液体培养（3）摇瓶培养实验室中常用的好氧菌培养法2.厌氧菌的液体培养实验室中对厌氧菌进行液体培养时，保证培养基的氧化还原电位（Eh）降至-150mV～-420mV，以适合严格厌氧菌的生长。厌氧罐或厌氧手套箱液体培养厌氧菌不必提供额外的培养措施单独放在有氧环境下培养有机还原剂加入能显著降低氧化还原电位的铁丝等巯基乙酸、半胱氨酸、维生素C或庖肉等加入无机还原剂用深层培养或同时在液面上封一层石蜡油或凡士林-石蜡油二、生产实践中培养微生物的装置（一）固体培养法1.好氧菌的曲法培养原始的曲法培养就是将麸皮、碎麦或豆饼等固态基质经蒸煮和自然接种后，薄薄的铺在培

5、养容器表面，使微生物既可获得充足的氧气，又可利于散发热量，对真菌来说，还十分有利于产生大量孢子。曲（qu或mouldybran）根据制曲的容器形状和规模的大小分类瓶曲袋曲（用塑料袋制曲）盘曲（用木盘制曲）帘子曲（用竹帘子制曲）转鼓曲（用大型木质空心转鼓横向转动制曲）通风曲（厚层制曲）机械化程度和生产效率较高的现代化制曲技术，酱油酿造业广泛使用。食用菌制种和培养挂曲小曲红曲近代人工踏制大曲AwholeprocessofDA-QUprepation一般是由一个面积在10m2左右的水泥曲槽组成，槽上有曲架和用适当材料编织成的筛板，其上可摊一层约30cm厚的曲料，曲架下部不断通低温、湿润的新鲜过滤

6、空气，制备半无菌状态的固体曲。转鼓式自动固体培养装置这是以米为原料，米曲霉（Asperigillusoryzae）固体培养生产日本酒曲的转鼓装置示意图。清洗、蒸煮、接种、固体翻松、水的喷淋、冷却、空气循环、过滤和排气等所有操作都在该装置上完成。2.厌氧菌的堆积培养法生产实践上对厌氧菌进行大规模固体培养的例子还不多见。在白酒生产中，一向用大型深层地窖对固态发酵料进行堆积式固态发酵，这对酵母菌的酒精发酵和己酸菌的己酸发酵等都十分有利，可生产名优大曲酒（蒸馏白酒）。（二）液体培养法1.好氧菌的培养（1）浅盘培养（shallowpancultivation）（2）深层液体通气培养生产实践上对厌氧菌

7、进行大规模固体培养的例子还不多见。在白酒生产中，一向用大型深层地窖对固态发酵料进行堆积式固态发酵，这对酵母菌的酒精发酵和己酸菌的己酸发酵等都十分有利，可生产名优大曲酒（蒸馏白酒）。（1）高层琼脂柱把含有还原剂的固体或半固体培养基装入试管中，经灭菌后，除表层上有一些溶解氧外，越是深层，其氧化还原势越低，故有利于厌氧菌的生长。例如，韦荣氏管（Veillontube）是由一根长25cm、内径1cm，两端可用橡皮塞封闭的玻璃管，