DB51T 798-2008 牛奶中氨苄青霉残留检测方法-酶联免疫吸附测定(ELISA)法

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1、ICS:65.020.30B40备案号：23072-2008DB51四川省地方标准DB51/T798-2008牛奶中氨苄青霉素残留检测方法－酶联免疫吸附测定(ELISA)法DeterminationofAmpicillinResiduesinMilkbyEnzyme-linkedImmunosorbentAssay2008-06-06发布2008-06-15实施四川省质量技术监督局发布DB51/T798-2008目次前言.................................................................................II1范围.

2、...............................................................................12规范性引用文件......................................................................13制样................................................................................14测定方法...................................................

3、.........................15检测方法灵敏度、准确度、精密度......................................................3IDB51/T798-2008前言为了加强食品安全检测，保障人民群众的身体健康和生命安全，有效监测牛奶中的氨苄青霉素残留，我们建立了《牛奶中氨苄青霉素残留检测方法—酶联免疫吸附测定法（ELISA）法》本标准按GB/T1.1—2000《标准的结构和编写规则》进行编制，GB/T1.2－2000《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》进行修改。本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准

4、由四川省质量技术监督局批准发布。本标准起草单位：四川省兽药监察所、四川省兽药残留监控中心。本标准主要起草人：程江、彭莉、岳秀英、熊浩山、官艳丽、王海波、吴晓岚。IIDB51/T798-2008牛奶中氨苄青霉素残留检测方法－酶联免疫吸附测定(ELISA)法1范围本标准规定了牛奶中氨苄青霉素残留量检测的制样和酶联免疫吸附测定法。本标准适用于牛奶中氨苄青霉素的残留量的快速筛选检测。本方法的最低检出限为10.0µg/L。对于可疑样品需用确证法确认。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，

5、然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682-1992分析实验室用水规则和试验方法3制样3.1样品的制备取适量新鲜的空白或供试牛奶，涡旋混合使之均匀，密封。3.2样品的保存-20℃以下冰箱中贮存备用。4测定方法4.1方法提要或原理将供试牛奶中的杂质用试剂沉淀后，取上清液以酶联免疫吸附测定法测定氨苄青霉素药物残留，其基本原理是抗原抗体反应。酶标板的微孔包被有偶联抗原，标样或样品中的氨苄青霉素和微孔条上预包被的偶连抗原竞争青霉素特异性抗体。通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标记抗原。加入底物液，结合到板上的

6、酶标记物将底物转化为有色产物。加入终止液，在450nm处测定吸光度值，吸光度值与试样中氨苄青霉素浓度呈反比。4.2试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的二级水。4.2.10.36M亚硝基铁氰化钠溶液的配制称取二水合亚硝基铁氰化钠(Na2Fe(CN)5.NO.2H2O)10.7g用水溶解定容至100mL即可。4.2.21M硫酸锌溶液的配制称取七水合硫酸锌(ZnSO4.7H2O)28.8g用水溶解定容至100mL即可。4.2.3氨苄青霉素试剂盒（采用官方备案的试剂盒）氨苄青霉素系列标准溶液0μg/mL、0.2μg/mL、0.6μg/ml、1.8μg

7、/mL、5.4μg/mL、16.2μg/mL4.2.4酶标板8条×12孔，包被有偶联抗原4.2.5酶标二抗4.2.6氨苄青霉素抗体工作液4.2.7底物溶液A4.2.8底物溶液B4.2.9浓缩洗涤液临用前用水稀释二十倍作为洗涤液1DB51/T798-20084.2.10浓缩复溶液临用前用水1：1稀释。4.2.11终止溶液4.3仪器和设备4.3.1酶标仪（配备450nm滤光片）4.3.2天平感量0.01g4.3.