DBS50 015-2013 食品安全地方标准 食品中大红粉的检测方法 高效液相色谱法

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1、ICS67.050X20DBS50重庆市地方标准DBS50/015—2013食品安全地方标准食品中大红粉的检测方法高效液相色谱法2013-06-03发布2013-10-01实施重庆市卫生局发布DBS50/015—2013前言本标准的附录A、附录B、附录C和附录D均为资料性附录。本标准为首次发布。IDBS50/015—2013食品安全地方标准食品中大红粉的检测方法高效液相色谱法1范围本标准规定了食品中大红粉的高效液相色谱检测方法。本标准适用于辣椒粉、辣椒酱、果酱、香肠、辣椒油、火锅底料及其类似食品

2、中大红粉的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。3术语和定义大红粉属偶氮系列化工合成染料。分子式：C23H17N3O2，分子量：367.4，CAS号：3789-75-1，化学名：4－[（2－苯基）偶氮]－3－羟基－N－苯基－2－萘甲酰胺。4试验方法4.1原理试样中的大红粉用乙酸乙酯-环己烷（1：1）提取，经凝胶渗透色谱（GPC）净化后，用高效液相色谱测定，

3、外标法定量。4.2试剂和材料除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.2.1甲醇：高效液相色谱级。4.2.2甲酸：高效液相色谱级。4.2.3丙酮：高效液相色谱级。4.2.4乙腈：高效液相色谱级。4.2.5无水硫酸钠，经650℃灼烧4h，备用。4.2.6乙酸乙酯。4.2.7环己烷。4.2.8三氯甲烷。4.2.9提取液及GPC淋洗液：将乙酸乙酯（4.2.6）和环己烷（4.2.7）等体积混合。4.2.10大红粉标准品：纯度≥95%。1DBS50/015—20134.2.1

4、1大红粉标准储备液：准确称取适量大红粉标准品（4.2.10），先用少量三氯甲烷溶解，再用丙酮配制成浓度为100μg/mL的标准储备液，于0℃～4℃保存。4.2.12大红粉标准工作溶液：根据需要用丙酮将标准储备液稀释成0µg/mL、0.01µg/mL、0.02µg/mL、0.04µg/mL、0.08µg/mL、0.16µg/mL、0.32µg/mL的标准工作溶液，于0℃～4℃保存。4.2.130.45m微孔滤膜，有机系。4.3仪器和设备4.3.1高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器或紫外-可见光检

5、测器。4.3.2GPC净化系统或手工GPC净化柱（制备方法见附录A）。4.3.3天平：感量为0.01g和0.0001g。4.3.4组织捣碎机。4.3.5超声波清洗器。4.3.6旋涡混匀器。4.3.7旋转蒸发仪。4.3.8具塞塑料离心管：50mL。4.3.9离心机：转速不低于4000r/min。4.4试样的制备将液体、半固体样品混合均匀，固体样品需粉碎，制样过程中应防止样品污染或发生待测物含量的变化。4.5测定步骤4.5.1提取4.5.1.1辣椒粉等粉状样品、香肠等肉制品、辣椒酱、果酱：称取5.0

6、g样品（辣椒酱、果酱等含水量较大的样品称取10g样品），精确至0.01g，于50mL离心管中，加入约25mL提取液（4.2.9），于漩涡混匀器上混合提取2min，再超声提取15min后，于4000r/min离心5min，上清液转移至50mL容量瓶中。再用20mL提取液（4.2.9）提取残渣，重复上述步骤，合并提取液，用提取液（4.2.9）定容至刻度，混匀，过微孔滤膜（4.2.13）后作待净化液。4.5.1.2辣椒油、火锅底料等油状样品：称取5.0g样品（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入

7、0.5g无水硫酸钠，加入约15mL提取液（4.2.9）充分振摇，于4000r/min离心5min，将清液转移至50mL容量瓶中。再用约15mL提取液（4.2.9）溶解样品，重复提取两次，合并提取液，用提取液（4.2.9）定容至刻度，混匀，过微孔滤膜（4.2.13）后作待净化液。4.5.2净化取10mL待净化液于GPC样品管中，用GPC仪进行净化，或者取5mL待净化液用手工GPC柱净化（净化参考条件见附录A），收集洗脱液，于40℃下旋转蒸发至干，残渣用1.0mL或0.5mL丙酮溶解后，过微孔滤膜（

8、4.2.13）后待测定。4.5.3测定4.5.3.1液相色谱检测条件a)色谱柱：ZorbaxEclipseXDBC18柱，5μm，4.6mm×150mm（或相当型号色谱柱）。2DBS50/015—2013b)流动相：A：0.1%甲酸水溶液：乙腈=85:15；B：0.1%甲酸乙腈溶液：丙酮=80:20。c)梯度洗脱程序：见表1。d)流速：1.0mL/min。e)柱温：35℃。f)进样量：20L。g)检测波长：500nm。表1梯度洗脱条件流动相时间（min）A%B%0257510.0257525.