《毛细管电泳法》课件

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1、第十二章　高效毛细管电泳HighPerformanceCapillaryElectrophoresis12.3基本概念电泳：一个“自由”的带电粒子在一定介质中在电场作用下的迁移。淌度，μep：表述物质电泳特性的参数，与粒子电荷、质量、半径、介质等有关。电渗，μeo：由于粘滞阻力的存在，离子的电泳会带动溶剂同向运动。正负离子当量数相同时，溶剂受到大小相等方向相反的作用力，因此通常观测不到溶剂的运动。若设法使某种离子不运动，则作用于溶剂的力便失去了平衡，溶剂发生单向流动，这种流动称电渗。在不考虑相互作用的前提下，粒子在毛细管介质中的运动速度是泳流速度和渗流

2、速度的矢量和。一般情况下，电渗流速度是电泳流速度的5-7倍，混合物中所有的组份随电渗流朝一个方向迁移。式中E：场强μeo电渗淌度μep电泳淌度12.2原理电渗流方向：高电位低电位正溶质离子所受的力：电场力+电渗力负溶质离子所受的力：电场力电渗力中性分子所受的力：电渗力溶质迁移方向由电场力和电渗力的矢量和决定，一般来说，溶质迁移方向与电渗流同。流出顺序：①正离子　②中性粒子　③负离子高压(+)ΘΘΘΘΘΘΘΘ电渗流(-)地柱效：N＝5.54（tR/W1/2)2tR、W1/2取同一单位通常采用石英毛细管柱，一般情况下，表面带负电荷。当其与

3、溶液接触时，在溶液中产生了一种过剩的正电荷与上述的负电荷平衡。在电场作用下，这层正电荷向负极移动，带动溶剂裹着溶质分子一起移动。ΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘ12.3　高效毛细管电泳仪器装置图清洗记录检测器高压电源毛细管电解液12.3.1　高压电源0-30KV输出，恒压恒流，正负极性可调。Pt丝电极12.3.2　进样系统A、重力（高度差）进样B、负压进样C、电渗法进样12.3.3　分离系统毛细管：I.D.50m-75m，长30-100cm12.3.4　检测系统商品仪器：UV-VIS，加石英聚焦镜；激光荧光实验室：质谱，电分析12.3.5　清洗系统一般

4、用负压法，NaOH洗液，减少吸附清洗对重现性影响重大12.4　分类常规区带电泳（CZE）胶束电动毛细管色谱（MECC）毛细管离子分析12.4.1　常规区带电泳（CZE）电解质缓冲液，正高压分离阳离子和大分子阴离子可控制变量：操作电压电解液柱长12.4.2　胶束电动毛细管色谱（MECC）揉合了毛细管电泳和液相分配色谱的原理，将表面活性剂加到电解液中，溶质分子进入体系后在胶束相和水相之间进行分配，不同的溶质分子因电泳速度和分配系数的不同而分离。MECC体系存在着类似于色谱的两相，一是流动的水相，另一相是移动的“固定相”—胶束相，溶质在这两相之间分配。主要用

5、于分离中性分子，正高压中性分子单靠电渗流，能移动，但不能分离。没有分配上的差异是不行的。表面活性剂的浓度足够大时，单体结合在一起，形成一个球体，称为胶束，这个足够大的浓度称为临界浓度。SO3－SO3－SO3－SO3－SO3－SO3－12.4.3毛细管离子分析加电渗流改性剂使电渗流反向，用于淌度很大的离子的分离，主要是无机阴离子的分离。负高压。加阳离子表面活性剂，e.g.十六烷基三甲基溴化铵电渗流ΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘX－X－X－X－X－（－）高压（＋）地12.5　应用及前景特点：A、分离效率高：104理论塔板数，接近GCB、分离速度快：优于LC，接近G

6、CC、进样量少：nLD、可分离GC受限制的物质应用：A、药物分析：旋光异构体B、生化分析：氨基酸衍生物、蛋白、DNAC、环境分析：PAH、阴离子、酚弱点：检测器的绝对灵敏度高，但浓度灵敏度仅为10-6发展趋势：A、检测器的创新B、预浓缩富集技术利用电泳原理富集阴阳离子C18等吸附剂在线应用C、移植成熟的液相色谱技术于毛细管电泳中发展趋势：D、微流控分析，FIA与CE的结合90年代兴起。几平方厘米芯片，通道宽20-100m，深10-30m。进样pL-nL，几百伏电压，几十秒钟完成分离。反应通道废液进样点试样通道试剂杯