sers标记纳米粒子用于免疫识别

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1、高等学校化学学报年月研究快报〕标记纳米粒子用于免疫识别‘,,‘,,,,,,’徐抒平王连英徐蔚青赵冰衰航马岚白玉白樊玉国吉林大学超分子结构与材料教育部重点实验,长春室吉林大学化学学院云南大学单克隆抗体工程技术研究中心,昆明关键词纳米粒子免疫标记中图分类一一一号文献标识码文章编号激光拉曼光谱技术近年来已成为研究生物分子结构常用的光谱手段尤其在研究水溶液中蛋白质,,的结构和构象方面发挥了重要作用然而常规拉曼光谱的信号强度很低限制了其在各个领域中的〕和表面增强共振拉曼光谱技术可使信号增强个数应用表面增强拉曼光谱,〔,量级一〕阁尤其是技术已发展到检测单分子的水平更为其在生物方面的应

2、用开拓了新的局,、、,、面目前蛋白抗体和等生物分子的标记方法种类繁多其中染料分子同位素和酶等,纳米粒标记方法较为成熟随着纳米粒子合成技术的发展子用于生物分子标记已成为研究的热点等困和等川用和等半导体纳米晶实现在动物细胞核膜和肌动蛋白纤维的荧光,标记但纳米晶的荧光谱带较宽多组标记难度较大等将纳米粒子标记与谱相结合应用于免疫反应等将光谱与银染色技术结合用于和杂交识别检测一,本文将琉基苯甲酸分子修饰的金纳米粒子与抗体结合形成免疫金探针免疫金探针与,固定于基底的抗抗体发生免疫识别后进行银染色染色后的纳米粒子的活性很好可通过,光谱对免疫应答进行检测本研究用金纳米粒子与生物分子具有良

3、好的亲和作用而银纳米粒,子比金粒子具有更强的效应的特点为光谱研究免疫识别又提供了一个有效的手段实验部分一一〕免疫金的制备金溶胶按等的方法制备球形粒子的平均半径约一拼一,,向金溶胶中加人反应对胶粒表面积和,加人量远远小,分子体积粗略计算可知于完全包裹溶胶粒表面的量为抗体吸附保留一定空位为防,止微量游离的分子干扰将溶胶离心再重新悬浮向吸附分子的金溶胶中加人过量抗体口或〕仁为抗乙肝病毒表面抗原抗体为抗前列腺抗原抗体〕室温下反,应离心用牛血清白蛋白封闭金表面空位一一,基底的制备按照文献」方法在干净的石英基片上进行,硅烷化修饰简称然后按照文献〕方法将硅烷化后的基片浸泡在戊二醛溶液,

4、一,体积比中进行醛基化修饰向基片上滴加抗抗体〔〔为对应℃下反,的抗体〕至覆盖完全应充分淋洗用美国公司的一一。原子力显微镜表征抗抗体组装俞后基片表面的形貌用的赖氨酸溶液饱和基片上未反应的醛基一一一一免疫识别的紫外光谱和检测将免疫金溶胶滴加在,,,,,基片上于℃下反应用超纯水清洗超声清洗除去未反应的免疫金用氮气吹干对苯二酚还原硝酸银染色用英国型共聚焦拉曼光谱仪进行检测以氢一一收稿日期基金项目国家自然科学基金批准号,资助联系人简介徐蔚青年出生,男,研究员,从事纳米材料及分子组装体光谱学研究一徐抒平等标记纳米粒子用于免疫识别离子激光器为激发光,一吸收光谱仪对染色前后的石英基片进源

5、波长用行表征结果与讨论利用原,子力显微镜观察醛基化后的以及进行抗原修饰后的表面形貌从图可见实验中所、,,使用的光学石英基片经过表面经基化硅烷化和醛基化后平均高度差在以下可见修饰抗抗体一,前的表面较为平整而经过组装之后表面粗糙度明显增加图〕由于,,图像是在脱离水体系下进行扫描的所以蛋白在空气中聚集成较均匀的球形其直,、径约为其覆盖程度较为致密说明石英基片表面经经基化硅烷化和醛基化后对蛋白有较好,,的亲和性能成功地组装成致密的抗抗体蛋白达到进行免疫检测的实验要求。拌拜·一一一一拌严,·一一一一,,把修饰的免疫金滴加在基底上超声清洗后石英一基片的光谱见图谱线处的吸收为免疫金的吸

6、收之间的平缓吸收,一一带为金聚集态的吸收可见修饰的免疫金已经固定在基底上由于与,所以免疫金之间的识别组装为单层吸收信号的信噪比较低染色前的拉曼光谱见图谱线。,,从拉曼光谱上看不到任何的增强信号虽然金溶胶也是很好的增强基底但其增强效果较银“,,差倍金溶胶的粒径较小为而最适宜的增强粒径约为士实验中使用的激光波,,〕,长为根据金的等离子体共振计算结果采用红光激发增强效果最好综上原因没有观一,察到信号是可以解释的银染色后的吸收较为明显图谱线处为银的特征,,吸收还原的银以免疫金为晶核生长速度较快从特征吸收峰位和半峰宽较大可知生成的银粒径较,,,大且不均一根据表面增强机理这样粗糙的染

7、色表面恰好适合检测为了对照首先采集了在蒸镀银岛膜上的光谱图谱线和银染色后的光谱图谱线通过将图工。。之宁一三‘扮合今曰︺工,代、认口、、在力巴二曰‘一一一上一一一止习。胜当己三二二二二‘一一一止二‘孟一一一一一一一·云高等学校化学学报。谱线与对照可确定为的拉曼增强信号这说明免疫金表面修饰的与基底上的,,进行了专一性识别通过抗体与抗抗体之间的作用免疫金胶粒被固定在基底上,一,为了说明免疫反应的专一性将醛基化后的基底直接用赖氨酸组装而没有滴加抗抗体则基底一,上裸露的醛基均被赖氨酸饱和经过同样条件的免疫金溶胶滴加和银染色然后进行拉曼光