实验六 薄层板的制备、活度测定及应用

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1、实验六薄层板的制备、活度测定及应用 一、目的要求（1）掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法；（2）掌握吸附剂活度测定的原理及方法；（3）应用薄层层析法检测识中草药化学成分。二、实验原理1、薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。　　根据分离的原理不同，薄层层析可以分为两类：用吸附剂铺成的薄层所进行的层析为吸附薄层层析；用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层，属于分配薄层层析。薄层

2、层析中以吸附薄层为多用，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。2、吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、范德华力等产生。吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分的性质影响，更与展开剂的性质有关。3、由于化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）：化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较

3、大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物。4、薄层层析可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达500mg样品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。特别适用于那些挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。三．实验步骤1、硅胶（H）羧甲基纤维钠（CM

4、C-Na）薄层板的制备（1）载玻片要求平滑清洁，没有划痕，在使用前可用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净（拿在手上立起来，如果发现水不是呈股流下，而是呈瀑布状态流下），置于烘箱中烘干。（2）取羧甲基纤维素钠0.5g，溶于50ml水中，在石棉网上加热搅拌使完全溶解，静置一夜，取上层清液（或冷却后，在布氏漏斗上平铺薄薄的一层脱脂棉，用蒸馏水润湿脱脂棉，启动真空泵，抽紧后倒入羧甲基纤维钠溶液）。 （3）加薄层层析用硅胶（颗粒度10~40μm）约12~16g，人工或磁力搅拌约半小时，混成均匀的稀糊状。将

5、载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。（铺板时，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入小气泡。）（4）铺好后的薄层板稍干后，放入烘箱内用50℃以下的温度鼓风干燥30分钟,再升至100℃下烘30分钟。冷后于干燥器内备用。未消耗的硅胶稀糊可贮存在广口瓶内，以供再用。2、硅胶活度的测定一般选用三种染料的薄层层析法进行测定。分别用毛细管吸取0.01%二甲基黄，苏丹红，靛酚蓝的苯溶液各10μl点滴于硅胶G或硅胶H薄层上，以苯

6、为展开剂，展开10cm（约20分钟）。三种染料应明显分离，靛酚蓝斑点接近于起始线，二甲基黄斑点在薄层的当中，苏丹红斑点在二甲基黄斑点之上，则认为薄层板活性符合要求。3、薄层层析的应用用毛细管吸取虎杖蒽醌成分乙醚提取液点滴在硅胶CMC-Na薄层，以石油醚：乙酸乙酯（9：1）为展开剂进行展开，待展开剂上到离薄层板顶端约1cm时，取出，晾干薄层板，在紫外等下观察薄层板分离效果，记录TLC结果。四、思考题1、硅胶、氧化铝、聚酰胺各适合于分离哪些类型的化合物？2、什么是边缘效应？它是怎样产生的？怎样克服？

7、3、薄层板为何要进行“活化”？4、点样的要求是什么，为什么要这样做？