中国药典2010年版--显微鉴别法

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1、显微鉴别法中药材及中药制剂的显微鉴别显微鉴别系指用显微镜对药材的(饮片)切片、粉末、解离组织或表面制片及含药材粉末的制剂中药材的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择有代表性的供试品,根据各品种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。光学显微镜的构造1.机械部分、2.照明部分、3.光学放大部分1.机械部分:1)、镜座:基座,稳定和支持整个镜体。2)、镜柱:支持镜臂。3)、镜臂:支持镜筒,拿镜时握持此臂。4)、镜筒:5)、物镜转换器:物镜孔,可安装不同放大率的物镜。6)、镜台:7)、调节器:分粗调和细调,细调在一圈范围内调2、照明部分:1

2、)、反光镜(光源):强时用平光镜,弱时用凹面镜。2)、聚光器3)、光圈光阑。3、光学放大部分1)、目镜:5X,10X,15X,内可放测微尺2)、物镜:低倍,镜筒短,筒径粗,5X。高倍,镜筒长,筒径细,40X,45X。油镜:镜筒最长,80X,85X。光学显微镜的使用(一)、低倍镜的用法1)、取镜:注意小心平稳轻放。2)、准备:3)、对光:4)、上片:注意有盖玻片的向上,注意取盖玻片时的拿法。5)、调节物距:注意先把低倍镜调至距玻片0.5厘米的样子——粗调——然后缓慢使物镜上调,直至视野里出现可见物。注意两个要领:一是慢,二是距离只允许调大不允许调小。标本片与物象移

3、动方向相反。如果调过了必须从头再来一次,直至视野里出现物象。(二)、高倍镜的用法用高倍镜的方法须在低倍镜取像的情况下,换高倍镜头,调节微调旋钮直至看清物象。调节范围在一圈以内。显微镜的维护①取镜时应一手紧握镜臂,一手平托镜座。安放好的显微镜就不要随意搬动。②使用前后,检查镜头和镜体,严禁随意拆卸。③保持清洁,避免灰尘和潮湿。避免阳光直射。远离挥发性和腐蚀性化学试剂。④镜筒下降时,眼睛一定要看着物镜。⑤使用显微镜时,一定要稳重、谨慎、轻拿轻放。显微镜不要放在实验桌的边缘,以防跌落地面。⑥实验完毕,把显微镜擦拭干净。再转动镜头转换器,把两个物镜偏到两旁。最后把显微镜

4、放进镜箱里,送回原处保存。显微测微器的使用显微测微尺是用来测量细胞在显微镜下长度的工具,由目镜测微尺和镜台测微尺组成,两尺配合使用。1.目镜测微尺放在目镜筒内的一种标尺,为一个直径18`22mm的圆形玻璃片,中央刻有精确等距离的平行线刻度,常为50格或100格2.载物台测微尺在特制的载玻片中央粘贴一刻有精细尺度的圆形玻片。通常将长1mm(或2mm)精确等分成100(或200)小格,每1小格长为10um,用以标定目镜测微尺3.目镜测微尺的标定用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜、目镜和镜筒长度时,目镜测微尺上每一格所代表的长度。取载物台测微尺置显微镜载物台上,在

5、高倍物镜(或低倍物镜)下,将测微尺刻度移至视野中央。将目镜测微尺(正面向上)放入目镜镜筒内,旋转目镜,并移动载物台测微尺,使目镜测微尺的“0”刻度线与载物台测微尺的某刻度线相重合,然后再找第二条重合刻度线,根据两条重合线间两重合线间两种测微尺的小格数,计算出目镜测微尺每一小格在该物镜条件下相当的长度(um),如目镜测微尺77小格(0~77)与载物台测微尺的30小格(0.7~1.0)相当,已知载物台测微尺每一小格的长度为10um。目镜测微尺每一小格长度为:10um*30/77=3.8um。当测定时要用不同的放大倍数时,应分别标定。4.测量方法将需测量的目的物显微制

6、片置显微镜载物台上,用目镜测微尺测量目的物的小格数,乘以上述每一小格的微米数。通常是在高倍镜下测量,但欲测量较长的目的物,如纤维、导管、非腺毛等的长度时,需在低倍镜下测量。记录最大值与最小值(um),允许有小量数值略高或略低于规定。药材显微制片1、横切片或纵切片制片取供试品欲观察部位,经软化处理后,用徒手或滑走切片法,切成10~20μm的薄片,必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置载玻片上,根据观察对象不同,滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液1~2滴,盖上盖玻片。必要时滴加水合氯醛试液后,在酒精灯上加热透化,并滴加甘油乙醇试液或稀甘油,盖上盖玻片。粉末制片供

7、试品粉末过四号筛,挑取少许置载玻片上,滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液,盖上盖玻片。必要时,按上法加热透化。表面制片将供试品湿润软化后,剪取欲观察部位约4mm2,一正一反置载玻片上,或撕取表皮,加适宜的试液或加热透化后,盖上盖玻片。解离组织制片将供试品切成长约5mm、直接约2mm的段或厚约1mm的片,如供试品中薄壁组织占大部分,木化组织少或分散存在,采用氢氧化钾法,若供试品质地坚硬,木化组织较多或集成较大群束,采用硝铬酸法或氯酸钾法。1.氢氧化钾法置供试品于试管中,加5%氢氧化钾溶液适量,加热至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去碱液,加水洗涤后,取出少量

8、置载玻片上,用解剖针撕开

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