蛙心灌流报告

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1、生理学实验报告蛙类离体心脏灌流院系：生命科学学院实验人：张优13941202邓晓娟13941201（本次实验报告由张优执笔）一、实验目的1、学习斯氏离体蛙心灌流法。2、了解心肌的生理特性。3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素,乙酰胆碱对离体心脏活动的影响。二、实验原理（一）两栖类动物无冠状循环两栖类动物无冠状循环，心肌直接从流经心腔的血流中获取营养。即心室肌直接从心室腔中获得营养。故用任氏液置换心室中的血液后，心室插管中的灌流液便成为心室肌的细胞外液。（二）心肌对细胞外离子浓度和体液因数敏感（三）钾、钙和钠离子对心肌特性的影响1.血钾浓度过高时（高于7.9

2、mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。2.血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。3.钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。三、实验材料青蛙、常用手术器械、蜡盘、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、滴管、小烧杯、纱布、棉线、任氏液、蛙心套管、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaC

3、l2、1％KCl、1：5000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、300U／mL肝素。四、实验步骤（一）蛙心的解剖1.毁脑毁脊髓2.打开胸腔3.剪开心包膜、暴露心脏（二）斯氏蛙心插管法1.结扎左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎。左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。2.插管6生理学实验报告左主动脉结扎处下方用眼科剪剪一小切口，将盛有任氏液＋少量肝素的蛙心插管由此口插入主动脉，至动脉圆锥时约“向后向下向前”试插，当心室收缩时容易经主动脉瓣插入心室腔内。3.心脏离体稳定套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧，将结线固定在套管的小玻璃钩上，

4、然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，使心脏离体。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致2cm。4.支架固定将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连。张力传感器与计算机采集系统相连。如右图。（三）实验观察操作（1）记录正常心搏曲线。（2）将蛙心插管0.65％NaCl溶液全部进行灌流，液面高度不变，并作好标记，观察用简单的生理盐水取代任氏液后心脏活动的变化。待心搏曲线出现明显变化时，立即吸去插管中的灌流液，同时作好冲

5、洗标记，并用正常、干净的任氏液清洗2～3次，待心搏恢复正常或接近正常，并保持稳定。（3）在插管内正常任氏液的基础上，加入2滴5%NaCl溶液，作好加药标记，观察心搏曲线的频率及振幅的变化。当曲线出现明显变化时，立即吸去插管中的灌流液，用干净任氏液清洗3次，待心搏恢复正常或接近正常，并保持稳定。（4）向插管内加入半滴2%CaCl2溶液，观察并记录心搏曲线的变化。当出现明显变化时，立即更换任氏液（方法同上），清洗，待心搏恢复正常或接近正常，并保持稳定。（5）向插管中加半滴1%KCl溶液，记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时，立即同法更换灌流液，清洗，待心搏恢复正常

6、或接近正常，并保持稳定。（6）同法记录插管中加入半滴1∶5000肾上腺素溶液后心搏曲线的变化。（7）同法记录插管中加入半滴1∶10000乙酰胆碱溶液后心搏曲线的变化。一、实验结果及分析1、正常博击曲线图6生理学实验报告方式速度（s/div）灵敏度（g）频率（Hz）张力23102、滴加0.65%NaCl溶液图方式速度（s/div）灵敏度（g）频率（Hz）张力2310滴加0.65%NaCl溶液后，心跳减弱，这是由于用0.65%NaCl溶液灌注蛙心时，由于灌注液中缺乏Ca2+，以致心肌细胞动作电位2期内流Ca2+减少，细胞质Ca2+浓度减少，心肌的收缩活动也随之减弱

7、。3.滴加5%NaCl溶液方式速度（s/div）灵敏度（g）频率（Hz）张力5310　　由于细胞外液中钠浓度差梯度的变化一般对心肌活动影响不明显。因此上图的心率变化与滴加0.65%NaCl溶液里变化并不是很大，两个不同浓度的相同溶液作用机理是一样的。但如果实验中滴加溶液顺序不一样，若先滴加5%NaCl.再滴加0.65%NaCl溶液，所得的心搏变化就不如图3那样明显了，收缩力仅出现很微弱的变化。4.滴加2%CaCl溶液6生理学实验报告方式速度（s/div）灵敏度（g）频率（Hz）张力51.510细胞外Ca2＋在细胞膜上对Na＋内流有竞争性抑制作用，称为膜屏障作用

8、。[Ca2＋]0增高时，Na＋内流受抑