动物细胞融合和单克隆抗体1

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1、2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体2002年12月30日，两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”—电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼”这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图知识回顾植物体细胞杂交过程植物细胞A（番茄）植物细胞B（马铃薯）去除细胞壁原生质体A原生质体B原生质体融合正在融合的原生质体再生出细胞壁

2、杂种细胞脱分化愈伤组织杂种植株(番茄马铃薯)再分化一、动物细胞融合（一）.动物细胞融合概念又称为细胞杂交。指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞（杂交细胞）进行有丝分裂（动物细胞培养技术）（二）.动物细胞融合过程1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？2、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？酶解

3、法，纤维素酶和果胶酶。无需，因为动物细胞无细胞壁。物理方法：离心、振动、电激；化学方法：聚乙二醇能；还可以利用灭活的病毒进行诱导。如灭活的仙台病毒请你思考3.融合后细胞的类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质5、为什么灭活的病毒能作为诱导剂？灭活的原理是什么？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。病毒灭活丧失感染活性保留融合活性（二）.原理：细胞膜的流动性。（三）.促进细胞融合方法：物理法：电激、振动、离心等化学法：聚乙二醇（PEG）生物法：灭活的病毒

4、（最常用）产生杂交细胞，即具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。（四）.结果：（五）动物细胞融合技术的意义和应用有何同？不同？动物细胞融合植物的体细胞杂交主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）生物：灭活的病毒物理（离心、振动、电激）化学（聚乙二醇）诱导融合方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合过程细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目（七）植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较人们获得抗体的传统方法是什么?动物体内刺激抗体筛选单一浆细胞不能无限增殖产生大量

5、抗体抗原浆细胞这种方法的缺点是什么?产量低、纯度低，制备的抗体特异性差。血清二、单克隆抗体每一个浆细胞只能产生一种特异性抗体体内产生的特异性抗体多达百万种如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞骨髓瘤细胞能无限增殖+一个浆细胞只分泌一种特异性抗体设计方案：1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验（一）.单克隆抗体的概念由单个B淋巴细胞（浆细胞）经过克隆形成的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。（二）.单克隆抗体的制备过程（

6、二）.单克隆抗体的制备过程①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？②会有几种融合方式？③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？④是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？⑤如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。诱导融合选择培养基克隆化培养体外培养或小鼠腹腔内增殖给小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴细胞（免疫）骨髓瘤细胞杂交细胞杂交瘤细胞（B-瘤细胞

7、）单克隆抗体产生特定抗体的杂交瘤细胞瘤-瘤细胞B-瘤细胞B-B细胞第一次筛选抗体阳性检测第二次筛选动物细胞融合动物细胞培养已知细胞增殖时合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的及其彼此融合的细胞不能增殖。人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交细胞中可利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。从培养液中分离出杂交细胞。如何筛选出培养液中的杂交瘤细胞？骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞是癌细胞吗？有

8、无限增殖能力（丧失凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞。肿瘤细胞不等于癌细胞。动物特异性免疫分离B淋巴细胞（B）；找到骨