可见紫外外分光光度法

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1、第二章紫外-可见分光光度分析法颜色的产生白光(太阳光)：由各种单色光组成的复合光吸光光度法的基本原理能复合成白光的两种颜色的光叫互补色光。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。光的波长λ(cm)、频率γ(Hz)，它们与光速c的关系是：一、光的基本性质在真空介质中，光速为2.9979×1010cm/s。单个光子能吸收或发射能量时，能量E与上述三要素的关系是：E－－光子的能量；h－－普朗克常数（6.625×10－34J·s）二、能级与跃迁分子中的电子总是处在某一运动状态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定能级。当它得到时，电子由于受到光、热

2、、电等的激发，得到适当的能量，从一个能级转移到另一个能级，称为跃迁。分子能级跃迁分子能级跃迁较原子能级跃迁更为复杂。分子内部除了电子运动状态外，还有核间的相对运动，即核的振动和分子围绕着重心的转动。振动能变化、转动能变化以及电子运动能量变化有色溶液的颜色为什么会有深浅？1、同一种物质对不同波长的光吸收能力是否存在差异？2、不同的物质对相同波长的光的吸收是否存在差异？分子只会选择吸收满足能级差能量的波长各种分子内部结构不同，分子的能级也千差万别，各种能级之间的间隔也互不相同，这样就决定了它们对不同波长的光线的选择性吸收。吸收曲线改变通过某一

3、吸收物质的入射光的波长，并记录某物质在每一波长处的吸光度（A），然后以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，这样的谱图称为该物质的吸收光谱或吸收曲线。反映了它在不同的光谱区域内吸收能力的分布，可以从波形，波峰的强度、位置及数目来了解物质内部信息叶绿素的结构和吸收光谱吸收曲线的讨论（1）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax（2）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似λmax不变。（3）而对于不同物质，它们的吸收曲线形状不同。（4）不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度A有差异，在λmax处吸

4、光度A的差异最大。（5）吸光度具有加和性，A=A1+A2+A3+……。三、比色法通过显色反应，比较待测溶液与标准溶液颜色的深浅来确定待测物质的含量为比色法。目视比色法光电比色法分子吸收分光光度法（分光光度分析法）分光光度分析法是以物质对光的选择性吸收为基础的分析方法。根据物质所吸收光的波长范围不同紫外分光光度法可见分光光度法几乎所有的无机离子和许多有机化合物可以用分光光度法进行测定。如微生物培养基中的氮、磷以及各种微量元素的测定。通常，待测物质的含量1～10－5％时，能够用分光光度法准确测定。所以它主要用于测定微量组分。分光光度分析法：基

5、于发射的电磁辐射与待测物质相互作用后所产生的辐射信号与物质组成及结构关系所建立起来的分析方法。光源单色器样品检测器1、一般光分析法均包含三个基本过程；（1）能源提供能量；（2）能量与被测物之间的相互作用；（3）产生信号。2、选择性测量，不涉及混合物分离（不同于色谱分析）；3、涉及大量光学元器件。基本特点：第二节紫外可见分光光度计仪器紫外-可见分光光度计一、基本组成generalprocess光源单色器样品室检测器显示1.光源在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区：钨灯作为光源

6、，其辐射波长范围在320～2500nm。紫外区：氢、氘灯。发射185～400nm的连续光谱。2.单色器（波长选择器）将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅；④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；⑤出射狭缝。光栅和棱镜分光原理3.样品室样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。

7、4.检测器利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。5.结果显示记录系统检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理二、分光光度计的类型1.单光束简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。2.双光束自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。3.双波长将不同波长的两束单色光(λ1、λ2)快束交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。△=1

8、～2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。A原理双光束光度计动画示意动画双波长光度计光路示意图四、光的吸收定律1.朗伯—比耳定律布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和