兔抗内皮细胞抗体(AECA)酶联免疫分析ELISA

兔抗内皮细胞抗体(AECA)酶联免疫分析ELISA

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4、催他迁帮深驼考魂猫顶拈晚凿僚搔快磊篇棕蛔孩进景汞磊能侗昧镇斌兔抗内皮细胞抗体(AECA)酶联免疫分析ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:E0439rb预期应用ELISA法定量测定兔血清、血浆或其它相关液体中抗内皮细胞抗体(AECA)含量。实验原理抗内皮细胞抗体(anti-endothelialcellantibody,AECA)被发现已有20余年的历史,其抗原是位于内皮细胞表面的一簇异质性蛋白,该抗体可出现在与血管炎有关的多种自身免疫病当中,尤其是系统性血管炎(systemicvasculit

5、is)和系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)等,为血管受损和血管炎的标记,在发病过程中与疾病的活动有很大的关系。本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中AECA水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入AECA抗原、生物素化的抗兔AECA抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的AECA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(

6、OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板:一块(96孔)标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1000ng/mL,做系列倍比稀释后,分别稀释成1000ng/mL,500ng/mL,250ng/mL,125ng/mL,62.5ng/mL,31ng/mL,15.6ng/mL,其原液直接作为最高标准浓度,样品稀释液直接作为标准浓度0ng/mL,临用前15分钟内配制。如配制500ng/mL标准品:取0.5ml1000ng/mL

7、的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。2.样品稀释液:1×20ml/瓶。3.检测稀释液A:1×10ml/瓶。4.检测稀释液B:1×10ml/瓶。5.检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。6.检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)

8、临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。7.底物溶液:1×10ml/瓶。8.浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。9.终止液:1×10ml/瓶(2NH2SO4)。标本的采集及保存1.血清:标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。2.血浆:可用EDTA或肝

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