常规石蜡制片HE染色技术

《常规石蜡制片HE染色技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、光镜下观察组织标本需克服的几个问题如何保持组织标本取材前的形态？如何制备薄组织片，允许光的通过而便于观察？如何使不同组织结构具有不同的光折射率，便于对标本进行结构的仔细辨别？光镜标本的基本制作技术第二章光镜样本的基本制作技术（组织制片技术）是医学研究和生物学研究中，观察细胞、组织的正常或病理形态变化的一种必不可少的手段，借此可以弥补活体观察的不足同时光镜样本的基本制作技术也是其它光镜标本技术的基础取材固定漂洗脱水透明浸蜡包埋切片脱蜡染色脱水透明封片光镜样本的制作的基本过程第一节取材及固定医学研究的组织样本来源人体（最好）临床的活检组织尸检组织（取材

2、方法及注意事项按病理学要求进行）正常组织用正常动物的组织材料替代一、动物致死法动物的福利，3R原则动物致死法选择致死动作应迅速1．断头法2．击头法3．麻醉法4．股动脉放血法5．空气栓塞法动物致死方法细胞标本制备1.印片法2.穿刺法3.沉淀法4.培养细胞标本制备二、取材及注意事项1．材料保持新鲜2．组织块免受挤压3．组织块力求小而薄4．尽量保持组织的原有形态5．选取好组织块的切面6．动物品种的选择和熟悉取材的解剖位置7．切除不需要的部分8．保持材料的清洁三、组织固定法固定是使要观察的组织构造尽量接近它取材前的状态（一）固定目的1．标本不发生离开身体后

3、或死后变化2．随后处理中，标本不易损坏3.组织块硬化4．使组织内各种结构产生不同的折光率，或对染料具有不同的亲和力（二）固定方法1．蒸气固定法（较细小而薄的标本）2．小块组织固定法（直接投入固定液中）3．注射、灌注固定法（体积过大或固定液极难渗入内部的组织标本）（1）局部灌注固定（肺、肝、肾、脑等）（2）全身灌注固定（小鼠、大鼠、兔、狗、猴、人）4.微波固定法灌注过程充分暴露心脏针尖插入左心室或升主动脉中快速灌注生理盐水剪开右心耳（或右心房）放血换灌固定液，先快后慢输入用量1.生理盐水大鼠需用80-100ml、兔150-200ml、猫200-250

4、ml、猴300-500ml、狗800-1000ml2.固定液动物血液量的2倍动物体重（g）×7%×20（ml）无论是局部灌注固定，还是全身灌注固定，在灌注完毕后，必须立即将组织块、器官或整个动物再放入同样的固定液中进行后固定1．组织块不宜过大2．软组织或较大块组织可先经2~3小时固定后，再修整成小块重投入新配制的固定液内继续固定3．固定液的量是组织块大小的5-20倍为宜，在固定组织的瓶底垫上脱脂棉、数层纱布或滤纸4．固定时间的长短视固定剂的种类、温度、组织块的大小而定（三）固定注意事项及影响因素1．甲醛（福尔马林）：商品甲醛的浓度是37%~40%的

5、甲醛水溶液。常用甲醛的固定液浓度是10%，而实际甲醛浓度只有4%固定小块组织(15×15×2mm)10小时左右经它长期固定的组织，需经24~48小时的自来水流水冲洗四、固定液（一）单纯固定液甲醛单纯固定液的常用配方10%甲醛水溶液37%-40%甲醛液10ml自来水或蒸馏水90ml10%甲醛生理盐水溶液37%-40%甲醛液10ml氯化钠0.85g自来水或蒸馏水90ml2．多聚甲醛：一种渗透速度极快的甲醛聚合物，在热水中可解聚成甲醛单体而溶解，在接近水的沸点时溶解极快；也可溶解于弱碱中。多聚甲醛溶液实际上是新配制的甲醛液，宜临用前配制4%多聚甲醛单纯固

6、定液的常用配方多聚甲醛4g蒸馏水（或0.2mol/LPB）50ml在通风橱内加热使之完全溶解，然后冷却0.2mol/LPB（或蒸馏水）～100ml3．戊二醛：一种常用的醛类固定剂，能较好的保存组织结构，但其穿透力弱，作为单纯固定液多用于电镜技术中。市售的戊二醛是25%的溶液，使用时需配制成1%~6%的不同浓度4．酒精：单纯固定液为80%~95%的浓度，不必水洗而直接脱水。多用于组织化学中的糖原固定酒精固定的组织易变硬和发脆、组织收缩较大，所以不易长时间停留其中（70%酒精除外）可作为配制混合固定液的基本成分5．其它固定液丙酮苦味酸醋酸重铬酸钾三氯醋

7、酸铬酸氯化汞锇酸用多种具有固定作用的试剂混合配制的固定液，达到各试剂在固定作用中具有的优缺点平衡目的（二）混合固定液常用混合固定液1．酒精-甲醛液（A-F液）95%或无水酒精（A）90ml37%~40%甲醛液（F）10ml2．Carnoy液冰醋酸10ml氯仿30ml无水酒精60ml3．Bouin液饱和苦味酸水溶液75ml甲醛液（37%~40%）25ml冰醋酸5ml4．Helly液重铬酸钾2.5g升汞5g蒸馏水100ml（以上是Helly储存液）甲醛液(37%~40%)(临用时加入)5ml5．1%多聚甲醛-1.25%戊二醛固定液多聚甲醛1g蒸馏水50

8、ml在通风橱内加热使之完全溶解，然后冷却25%戊二醛5ml0.2mol/LPB（pH7.4）～100ml第二节固定后处理及