《细胞传代》PPT课件

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1、细胞传代组织培养(Tissueculture)是在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使从体内取出的组织生存、生长繁殖和传代，并维持原有的结构和功能特性。广义的组织培养与体外培养同义。体外培养(Invitro)包括所有结构层次的培养，即：组织培养、细胞培养和器官培养。    所谓细胞培养(Cellculture)是指细胞包括单个细胞在体外条件的生长。体外培养细胞的生存条件：营养：体外培养细胞所需的营养物质与体内相同，主要有糖、氨基酸和维生素三大类。环境：①无菌，无菌是保证培养细胞生存的首要条件。②温度，组织培养的最适温度为35-

2、37℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢和生长将会受到影响，甚至导致死亡。③气体，气体也是细胞生存的必需条件之一。所需的气体主要有O2和CO2。④pH值，多数细胞的适宜pH值为7.0-7.4，偏离此范围对细胞可产生有害的影响。体外培养细胞分型离体培养细胞大多生长在甁皿等容器中，根据是否能贴附在支持物上生长，分为贴附型和悬浮型。粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式结果:基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须粘附于一固相表面才能生存和生长培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相

3、表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞细胞在体内、外的粘附方式：存在差异体内：粘附是全方位,外形具有复杂的立体特征体外：多数情况，细胞只有一个附着平面；外形一般与体内时明显不同按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型1、成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。名称：凡在培养中形态与成

4、纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞，心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形

5、态。名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同来源：来源于外胚层、内胚层细胞,如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。4、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。培养细胞形态不稳定血清Hela高血清低血清成纤维细胞样上皮样细胞pHHel

6、a太酸或太碱标准pH成纤维细胞样上皮样细胞细胞密度3T3低密度高密度成纤维细胞样上皮样细胞生长状态改变悬浮或贴附悬浮贴附圆形成纤维或上皮样转化与否未转化转化后成纤维样可成上皮样悬浮型：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。体内细胞生长在动态平衡环境中，组织培养细胞的生存环境是甁皿等容器，生存空间和营养是有限的，当细胞增殖达到一定密度后，需要分离出一部分细胞和更新营养液，这一过程称传代（passage或subculture)。传代的频率与接种细胞数量、细胞生物特性以及营养液的性

7、质等有关。细胞“一代”仅指从细胞接种到分离再培养的一段时间，它与细胞世代或倍增不同。在细胞的一代中，细胞能倍增3～6次。细胞传一代后，一般要经过三个阶段：1游离期：即细胞接种后在培养液中呈悬浮状态的阶段，也称悬浮期2.指数增长期：是细胞增殖旺盛的阶段，细胞分裂相多。3.停止期：细胞数量已达饱和密度，细胞停止增殖，也称平顶期。培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长的细胞可直接吹打传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。操作步骤选择生长良好的A549细胞一瓶，轻

8、轻摇动培养瓶数次，悬浮起附着在细胞表面的碎片，然后连同培养液倒出，用D-Hanks洗1次。加入消化液5滴，翻