《细菌分离与鉴定方》PPT课件

《细菌分离与鉴定方》PPT课件

ID:39666924

大小:400.11 KB

页数:31页

时间:2019-07-08

《细菌分离与鉴定方》PPT课件_第1页
《细菌分离与鉴定方》PPT课件_第2页
《细菌分离与鉴定方》PPT课件_第3页
《细菌分离与鉴定方》PPT课件_第4页
《细菌分离与鉴定方》PPT课件_第5页
资源描述:

《《细菌分离与鉴定方》PPT课件》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库

1、细菌分离与鉴定方法—嗜水气单胞菌分离鉴定分离方法细菌的生长状况观察氧化酶试验AHM鉴别培养吲哚试验革兰氏染色法糖发酵试验脱脂奶平板试验(酪蛋白胨化试验)分离方法用途:在检查含两种或两种以上的待检材料(如肝、脾、肾、心、肌肉等)中的某种细菌时,须先将待检材料进行分离培养。常用的分离培养方法是琼脂平皿分区划线法,是借划线将混杂的细菌在琼脂平皿表面分散开来,使个别的细菌能固定在某一点,经培养生长繁殖后形成单个菌落,以达到分离获得纯种细菌的目的。分离方法具体操作方法如下:点燃酒精灯,右手执笔式握持接种环(见图1),在酒精灯火焰上烧灼接种环,待冷,取待测菌液一环。左手抓握琼脂培养基平皿,用手掌将平皿的底

2、固定,用手指将平皿的盖略抬起一些,进行接种(见图2)。或者,将平皿的盖留在实验台上,尽量直立平皿靠近酒精灯火焰,右手持接种环在琼脂表面的一端(即1区,约占整个平皿的1/6~1/5)涂布,划线时,接种环与琼脂表面呈30°~40°的角度轻轻接触,利用腕力动作,切忌划破琼脂表面。烧灼接种环,待冷后,将接种环通过1区划线数次,在2区作连续划线,各线条间隔要小,但不能重叠。划满平皿的1/5~1/4区域,划完2区不需烧灼接种环,继续通过2区数次,在3区作连续划线,如此反复至划完整个平皿(如图3)。图1接种环的握持方法图2平皿的握持方法1区4区3区2区图3划线分离的方法左:分区右:培养后的结果分离方法接种完

3、毕,盖好平皿盖,在平皿底玻璃上用记号笔注明标本名称、接种时间、接种者等。然后将平皿的底朝上,放置在37℃孵箱内孵育24h。取出后观察琼脂表面的菌落分布情况(见图3),注意观察最后1~2区内是否分离出单个菌落,并观察记录菌落特征(如菌落大小、形状、透明度、色素等情况)。烂鳃病病原菌平板划线分离:取病鱼鳃丝一小块,置于滴有无菌水的载玻片的边缘,10分钟,用接种环蘸水,在胰胨琼脂培养基上划线。肠炎病病原菌划线分离:用70%酒精棉球擦拭鱼体,无菌条件下,取病鱼的肝或脾或肾或心于普通营养琼脂基划线分离。赤皮病病原菌划线分离:用刀片刮除病灶腐烂部分后用接种环挂取病料,在普通营养琼脂培养基上平板划线。28℃

4、培养24h。细菌的生长状况观察原理◆细菌于适宜条件下在不同的培养基上生长,其生长状态不同。不同细菌在同一种培养基中生长,生长特点也不相同。这些区别称之为培养特征,是鉴别细菌和细菌分类的依据之一。◆把细菌接种在固体培养基上,在适宜的条件下经过一定时间的培养,在培养基表面(或内部)形成肉眼可见的有一个细菌大量繁殖后而成的集团,称之为菌落。不同细菌的菌落大小、光浊度、色泽均有其特征。普通琼脂平板牛肉膏3.0g蛋白胨10.0g氯化氯化钠(NaCL)5.0g磷酸二氢钾(KH2PO4)1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mL混匀,加热溶解,调PH至7.6分装,112kPa高压灭菌15min,冷却至45℃倾

5、注灭菌平板。直径90cm平皿每皿倾入15~20ml培养基,培养基过少,划线分离时细菌的营养较少,菌落生长过小,菌落形态不易观察,培养基也易于干燥,不易在数天内对菌落形态进行观察。含糖培养基灭菌条件115℃,10~15分钟一般培养基灭菌条件121℃,15~20分钟细菌的生长状况观察在无菌平皿中,倒入溶化后50℃普通营养琼脂培养基,每皿约20毫升,水平静置待凝固。用接种环挑去待分离菌株分区划线,28℃培养24h。菌落形态观察:大小:以毫米计。形状:圆形、不规则形、放射状等。表面:光滑、粗糙、圆环状、乳突状等。边缘:整齐、波形、锯齿状等。色素:有颜色,颜色,是否可溶等。透明度:透明、半透明、不透明。

6、嗜水气单胞菌菌落为光滑、微凸、圆整、无色或淡黄色,有特殊芳香气味。氧化酶试验原理氧化酶亦即细胞色素氧化酶,为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶,系由细胞色素a和a3所组成,一般仅存于需氧菌和兼性厌氧菌中,它使细菌能利用氧作为氢的最终受体,使分子氧还原为过氧化氢,过氧化氢的积累会有毒性,固本试验的阳性菌,不仅需氧而且能产生过氧化氢酶。氧化酶并不是直接与试剂起反应,而是先使细胞色素c氧化,然后此氧化型细胞色素c再使对苯二胺氧化,产生颜色反应,因而本试验实际也是测定细胞色素c是否存在。氧化酶试验试剂1%盐酸二甲基对苯二胺水溶液或1%二盐酸四甲基对苯二胺水溶液。方法在干净的培养皿中放一张滤纸,滴上二甲基对

7、本二胺的1%水溶液,仅使滤纸湿润即可,不可过湿。用白金丝接种环(不可用镍铬丝)取18~24小时的菌苔,涂抹在湿润的滤纸上,在10s内涂抹菌苔现红色者这为阳性,(四甲基对本二胺呈蓝色),10~60s现红色者为延迟反应,60s以上现红色者不计,按阴性处理。嗜水气单胞菌为阳性。氧化酶试验注意事项二甲基对本二胺溶液易于氧化,一般于冰箱中储存两周。如溶液颜色转红褐色,则不宜使用。铁、镍等金属可催化二甲基对苯

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。