《细菌的检查方法》PPT课件

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1、细菌学诊断标本采集和送检六原则避免杂菌污染不同期不同标本用抗生素以前采集病变明显部位标本作好标记标本必须新鲜显微镜放大法：普通光学显微镜：0.25um0.25mm电子显微镜：透射电镜、扫描电镜染色法病原菌检测细菌形态与结构检查结晶紫1min卢戈碘1min95%乙醇30s稀释复红30s的意义1.将细菌区分为2大类GramStain2.指导选择抗菌药物3.用于细菌致病性等方面的研究直接涂片镜检形态和染色性具有特征的致病菌，直接涂片染色后镜检有助初步诊断。痰液抗酸性细长杆菌结核杆菌脑脊液淤血点肾形,G-双球菌脑膜炎奈瑟菌脓液G+葡萄串状球菌葡

2、萄球菌病原菌检测分离培养和鉴定确诊细菌感染性疾病最可靠的方法（金标准),有助于选用抗菌药物及评价疗效。①普通培养法（需氧培养法）②高渗培养法③厌氧培养法病原菌检测临床标本预处理增菌接种培养基，分离单个菌落各种鉴定试验涂片染色快速诊断试验生化试验血清学实验涂片染色药敏试验动物试验初步诊断报告最终诊断报告一般检验程序病原学诊断分离培养和鉴定①培养特征：营养、生长条件、菌落特征②形态特征：细菌形态、排列、染色性③生化反应：检测细菌对各种基质（糖类和蛋白质）的代谢作用和代谢产物的差异，借以区别和鉴定细菌。病原菌检测生化反应如:幽门螺杆菌尿素酶分

3、解尿素产氨,使培养液变碱,pH指示剂变色。微量、快速、半自动或自动细菌生化鉴定和细菌药敏分析系统，使病原菌检出水平提高，时间缩短。病原菌检测病原菌检测血清学试验用含已知特异性抗体的免疫血清，可有效检出标本中极微量细菌特异抗原，或与分离培养出的未知纯种细菌进行血清学试验，确定致病菌的种或型。常用方法有玻片凝集试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、协同凝集、乳胶凝集、免疫电泳、间接血凝等试验。病原菌检测动物试验利用实验动物可进行病原菌的分离鉴定，检测细菌毒力等。常用实验动物有小鼠,豚鼠和家兔等。接种途径有皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉等。病原

4、菌检测药物敏感试验纸片法试管稀释法病原菌检测其他方法分子生物学技术核酸杂交技术PCR生物芯片技术聚合酶链反应是一种模拟天然DNA复制的体外扩增法，其基本原理如下：加热使双链DNA解开螺旋↓在退火温度条件下引物同模板杂交↓在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物↓重复上述变性→退火→引物延伸过程至25-40个循环。靶序列被扩增上百万倍，达到体外扩增核酸序列的目的。PCR技术核酸杂交技术杂交方法是一种分子生物学的标准技术，用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）。DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维

5、素或尼龙膜上，与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记。在膜上杂交时，探针通过氢键与其互补的靶序列结合，洗去未结合的游离探针后，经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。生物芯片技术该技术系指将大量（通常每平方厘米点阵密度高于400）探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。血清学诊断用已知抗原检测病人血清抗体直接凝集试验补体结合试验中和试验乳胶凝集ELISA