日生化需氧量的测定稀释接种法

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1、BOD5的测定及影响因素--稀释接种法主讲人：谭宁中国石化集团四川维尼纶厂分检车间监测组五日生化需氧量的测定一、目的和要求了解BOD5测定的意义及稀释与接种法测BOD5的基本原理。掌握本方法操作技能，如稀释水的制备、稀释倍数选择、稀释水的校核和溶解氧的测定等。二、原理生化需氧量是指在好氧条件下，微生物分解存在水中的有机物质的生物化学过程中所需的溶解氧量。根据参加反应的物质和最终生成的物质，可用下列的反应式来概括生物化学反应过程：酶6C6H12O6+16O2+4NH34C5H7O2N+16CO2+28H2O微生物有机污染物CO2+H2O+NH3O2微生物分解有机物是一个

2、缓慢的过程，要把可分解的有机物全部分解掉常需要20d以上的时间，微生物的活动与温度有关，所以测定生化需氧量时，常以20℃作为测定的标准温度。一般来说，在第5天消耗的氧量大约是总需氧量的70%，为便于测定，目前国内外普遍采用20℃培养5d所需溶解氧含量作为指标，单位以的mg/L表示，简称BOD5。水体发生生物化学过程必须具备：水体中存在能降解有机物的好氧微生物。对易降解的有机物，如碳水化合物、脂肪酸、油脂等，一般微生物均能将其降解，如硝基或硫酸取代芳烃等，则必须进行生物菌种驯化。有足够的溶解氧。为此，实验用的稀释水要充分曝气以达到氧的饱和或接近饱和。稀释还可以降低水中有

3、机污染物的浓度，使整个分解过程在有足够的溶解氧的条件下进行。有微生物生长所需的营养物质。本实验加入了一定量的无机营养物物质，如磷盐酸、钙盐、镁盐和铁盐等。稀释法测定BOD5是将水样经过适当稀释后，使其中含有足够的溶解氧供微生物5d生化需氧的要求，将此水样分成两份。一份测定培养前的溶解氧；另一份放入20℃恒温箱内培养5d后测定溶解氧，两者的差值即为BOD5。水中有机污染物的含量越高，水中溶解氧消耗愈多，BOD5值也愈高，水质愈差。BOD5是一种量度水中可被生物降解部分有机物（包括某些无机物）的综合指标，常用来评价水体有机物的污染程度，并已成为污水处理过程中的一项基本指标

4、。三、仪器与试剂恒温培养箱[（20+1）℃]。20L细口玻璃瓶。1000～2000mL量筒。特制搅拌棒，在玻璃下端安装一个2mm厚，大小和量筒相匹配的有孔橡皮片。250~300mL碘量瓶，带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口。虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。氯化钙溶液。称取27.5g无水氯化钙，溶于水中，稀释至1000mL。三氯化铁溶液。称取0.25g三氯化铁（FeCl3·6H2O），溶于水中，稀释至1000mL。硫酸镁溶液。称取22.5g硫酸镁（MgSO4·7H2O）,溶于水中，稀释至1000mL。磷酸盐溶液。称取8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、21.75g磷

5、酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g磷酸氢二钠（NaHPO4·7H2O）和1.7g氯化氨（NH4Cl），溶于约500mL水中，稀释至1000mL并混合均匀，此缓冲溶液的pH应为7.2。葡萄糖-谷氨酸溶液。分别称取150mg葡萄糖和谷氨酸（均于130℃烘过1h），溶于水中，稀释至1000mL。盐酸溶液，0.5mol/L。氢氧化钠溶液，0.5mol/L。稀释水。在20L玻璃瓶内加入18L水，控制水温在20℃左右，用抽气或无油压缩机通入清洁空气2~8h，使水中溶解氧饱和或接近饱和（20℃时溶解氧大于8mg/L）。使用前，每升水中加入氯化钙溶液、三氯化铁溶液、硫酸镁溶液和磷酸

6、盐溶液各1mL，混合均匀。稀释水pH值应为7.2，其BOD5值应小于0.2mg/L。接种稀释水。取适量生活污水于20℃放置24~36h，上层清液即为接种液，每升稀释水中加入1~3mL接种液即为接种稀释水。接种稀释水pH值应为7.2，其BOD5值以在0.3～1.0mg/L之间为宜，接种稀释水配制后应立即使用。对某些特殊工业废水最好加入专门培养驯化过的菌种。其他溶液。与碘量法测定溶解氧实验相同的硫酸锰溶液、碱性碘化钾溶液、（1+5）硫酸、0.025mol硫代硫酸钠标准溶液和1%的淀粉溶液（详见实验四“水中溶解氧的测定”）。四、操作步骤1、水样的采集、存储和预处理采集水样于

7、适当大小的玻璃瓶中（根据水质情况而定），用玻璃塞塞紧，且不留气泡。采样后，需在2h内测定；否则，应在4℃或4℃以下保存，且应在采集后10h内测定。用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调节pH值接近7。游离氯大于0.10mg/L的水样，加亚硫酸钠或硫代硫酸钠除去。确定稀释倍数。2、水样的稀释根据确定的稀释倍数，用虹吸法把一定量的污水引入1000mL量筒中，再沿壁慢慢加入所需稀释水（接种稀释水），用特制搅拌棒在水面以下慢慢搅匀（不应产生气泡），然后沿瓶壁慢慢倾入两个预先编号、体积相同的(250mL)的碘量瓶中，直到充满后溢出少许为止。盖严并水