植物无性系的快速繁殖

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1、第五章植物无性系的快速繁殖植物无性系的快速繁殖分五个阶段：第一阶段，无菌培养物的建立（外植体的建立）第二阶段，诱导外植体生长与分化第三阶段，试管苗的增殖和继代培养第四阶段，壮苗与生根第五阶段，小植株的移栽驯化无菌培养物的建立植物材料的准备源植物的预处理植物材料的采集植物材料的消毒无菌操作初代培养物初代培养建立起来的条件初代培养中易出现的问题及对策源植物的预处理为获得健康、无菌的植物材料，需要在材料采集之前进行预处理，即将源植株栽培在特殊管理的大田或温室，或进行室内盆栽如果必须从大田中采集植物材料，则须做到采集未休眠或绽放前带芽鳞的芽用

2、塑料布包裹将用的茎段或植物体部分，待长成后采集用最幼嫩的枝条将枝条采回后用流水冲洗。植物材料的采集选择植物材料应遵循的原则：1、外植体再生能力强；2、遗传稳定性好；3、外植体来源丰富；4、外植体灭菌容易。植物材料的采集植物材料的采集要考虑消毒的难易程度天气、季节、生长环境、生长状态、取材部位等培养目的组织培养中的反应性即植物材料自身因素对培养中生长和发育的影响，也就是培养的难易程度培养目的从培养目的讲苗木快速无性繁殖：多采用腋芽茎段、原球茎或茎尖（分生组织）作起始培养材料生产单倍体植株：多采用花粉(药)培养或未受精胚珠培养生产植物次生

3、代谢物：常用活体中该天然物质含量最丰富的部位游离的细胞作起始培养材料组织培养中的反应性基因型源植株年龄组织或器官的年龄生理状态健康状态取材季节生长条件取材位置外植体大小损伤外植体的极性和接种方法预处理基因型双子叶植物常比单子叶植物容易获得再生植株，而裸子植物的再生能力则非常有限同属不同种，甚至同种不同品种，器官分化和植株再生能力也有很大的差异源植株年龄植物的胚性组织常具有较高的再生能力随着植物年龄的增加，其再生能力会随之而下降植物组织培养常选用幼龄植物的组织或器官作外植体组织或器官的年龄幼嫩柔软(非木质化)组织一般比年老的木质化的组织

4、更易于组织培养在开花期，植物的再生能力都得到提高生理状态外植体的生理状态显著影响着细胞分裂状态一般而言，处于植物营养生长状态的外植体比生殖生长时具有更强的再生能力健康状态从健康的植株上取材，培养成功的可能性显然远远大于不健康的植株。在为营养繁殖选取外植体时，源植株的健康状态对消毒的难易程度、培养的难易程度及再生植株的表现都有很大影响，所以要慎之又慎。取材季节从大田栽培或野生的植物上采集外植体时，要考虑取材时的季节因素冬季是否严寒(严寒有利于打破休眠)夏季是否干燥(水分供应不充足，就生长得差)生长季节是否光照充足(光照不足，营养物质贮备

5、较少)生长条件自然昼长和自然光照条件下生长的植物材料同温室中甚至试管中离体培养的植物的培养反应有所不同与大田植物相比，生长在温室中的植物更易伸长和黄化，在培养中也更容易再生取材位置从树体上游分离外植体时，位置越靠上，不定根发生的可能性就越小，这是由于上部要比下部更为成熟按照植物生理学的观点，沿植物主轴，愈向上生长时间愈短，但其生理或发育特性则愈近发育成熟，也就愈可能形成花器官；而愈靠近下部则愈近发育上的幼态，不定根发生能力也愈强外植体大小离体部分愈大，就愈易诱导其生长和再生，同时添加的营养和植物生长调节物质的依赖性也有所下降分生组织越

6、大，存活率越高，却对于脱除病毒不利，外植体愈小的旺盛生长的分生组织区域，病毒含量就越小或无，脱除病毒的机会也就越大切取大小不同的伤口面积同无损伤部分的比例也应加以考虑，因为它会影响到再生能力损伤损伤组织对培养反应影响大，因为损伤区域可以扩大对营养物质和生长调节物质的吸收，同时也增加乙烯的产生外植体的极性和接种方法外植体的极性也显著影响着培养中的反应，极性同某些生理活性物质的浓度梯度有关外植体的接种方式有两种：有时极性方式直立，非极性方式倒置。有时非极性接种方式根和芽再生比极性接种方式更容易，也更快预处理原初外植体可通过预处理来改变其生

7、理状态低温处理将外植体置于一定的溶液中(含糖、BA、GA3等或不同浓度的BA)利用注射的方法注入生长调节物质植物材料的消毒消毒剂使用浓度去除难易消毒时间（分）效果次氯酸钙9％－10％易5－30很好次氯酸钠2％易5－30很好过氧化氢10％－12％最易5－15好溴水1％－2％易2－10很好硝酸银1％较难5－30好氯化汞0.1％－1％较难2－25最好抗生素4－50mg/L中30－60较好酒精70％－75％易数秒－5分好漂白粉饱和易5－30很好植物材料的消毒外植体消毒的步骤：外植体取材自来水冲洗70％酒精表面消毒（20－60s）无菌水冲洗消毒

8、剂处理无菌水充分洗净备用植物材料的消毒茎段、茎尖或叶柄、叶片表面消毒地下根茎消毒果实和种子消毒花药或未授精胚珠等消毒注：为了增强消毒效果，采用如下方法：将植物材料在灭菌前用清洁的流水(或自来水)冲洗0.5—2小时向消毒剂