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《植生、生化实验解读--北大吴光耀》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、2011年精英教案第五届全国中学生物竞赛培训植生、生化实验解读课北京大学生命科学学院吴光耀教授1.蛋白质测定(1)总N量测定有机N(甘氨酸)+H2SO4—→2CO2+3SO2+4H2O+NH3(NH4)2SO4+2NaOH—→2H2O+Na2SO4+2NH3NH4HB4O7+HCl+5H2O—→NH4Cl+4H3BO3用酸滴定氨1.蛋白质测定(2)双缩脲法测两个以上的肽键碱性环境双缩脲与Cu++生成紫红色化合物540nm[(NH2)2CO]2—→NH2-CO-NH-CO-NH2+NH31.蛋白质测定(3)
2、Folin-酚法是改进的双缩脲法640nm同时测定了酪氨酸酚基。1.蛋白质测定(4)紫外法280nm比色1.蛋白质测定(5)考马斯亮蓝法考马斯蓝G-250可与蛋白结合,从红色染料转变成蓝色。595nm测定吸收值2.核酸测定(1)RNA测定—→地衣酚法RNA+HCl—→糠醛(核糖转变)糠醛+3,5-二羟基甲苯(地衣酚)—→鲜绿色670nm比色2.核酸测定(2)DNA测定—→二苯胺法DNA+冰乙酸—→羟酮基戊醛(脱氧核糖转化)羟酮基戊醛+二苯胺—→蓝色595nm比色2.核酸测定(3)定磷法有机磷+高氯酸—→无
3、机磷无机磷+磷钼酸—→钼蓝660nm比色2.核酸测定(4)紫外法260nm比色3.质粒DNA提取和测定(1)扩增质粒LB+氨苄青霉素(2)细菌裂解+碱(质粒DNA出来,染色体DNA变性)(3)沉淀蛋白+乙酸钾、酚-氯仿(4)纯化质粒DNA水相质粒DNA用乙醇沉淀+RNase溶于Tris缓冲液中(5)260nm测定,或电泳测定4.DNA平板电泳(1)制胶Tris-硼酸缓冲液(TBE)+1%琼脂糖(2)加液TBE液(3)加样样品+花青素(4)电泳滤光板看DNA移动过程5.PCR(Polymerasechain
4、reaction)----DNA扩增(1)模板、引物、dNTP、聚合酶、缓冲液、Mg++(2)过程:模板双链分开→结合引物→新链合成(3)可用毛囊DNAY染色体DNA,设计引物,PCR,男有女无.播放动画6.层析(1)分配层析纸层析、液相层析(2)吸附层析活性碳、氧化铝(3)交换层析离子交换剂(4)凝胶层析SephadexSepharoseSuperdex7.糖的测定(1)萘酚反应糖+酸—→糠醛+萘酚—→紫环反应(2)蒽酮反应糖+蒽酮+硫酸—→兰绿色7.糖的测定(3)间苯二酚反应酮糖+酸—→羟甲基糠醛+间
5、苯二酚—→鲜红色(4)甲基间苯二酚反应戊糖+酸—→糠醛+地衣酚—→兰色沉淀己糖-----------------------------褐色沉淀8.还原糖测定(有自由醛基)(1)费林反应葡萄糖+Cu(OH)2+NaOH氧化亚酮—→红黄色9.叶绿素性质双羧酸的酯—→酯溶性.非极性溶剂(正己烷、石油醚)荧光+HCl—→去镁叶绿素—→+乙酸铜—→铜代叶绿素+NaOH—→皂化10.线粒体氧化磷酸化磷氧比(P/O):这一电子传递链过程中,形成ATP的量与消耗氧分子之间的比为磷氧比11.希尔用离心机分离了菠菜叶绿体,
6、他在分离叶绿体中加入氧化态的氧化还原剂---2,6二氯靛酚(DCIP)后照光,发现DCIP被还原(氧化态兰色,还原态无色),并有氧的释放。回答问题: (1)你认为分离叶绿体要下述哪些条件A.一定pH的缓冲液B.溶液有一定的渗透势C.离心分离的叶绿体用水悬浮D.离心时,离心速度愈高愈好E.在摄氏4度操作和离心最好F.在室温操作最好回答问题: (1)你认为分离叶绿体要下述哪些条件A.一定pH的缓冲液B.溶液有一定的渗透势C.离心分离的叶绿体用水悬浮D.离心时,离心速度愈高愈好E.在摄氏4度操作和离心最好F.在
7、室温操作最好回答问题: (2)你认为这一实验证明了什么?光反应产生氧B.CO2被还原C.光反应产生还原剂D.水被光解回答问题: (2)你认为这一实验证明了什么?光反应产生氧B.CO2被还原C.光反应产生还原剂D.水被光解希尔进一步实验,他将分离叶绿体悬液破碎,离心,分成绿色的沉淀和无色的上清液两部分,沉淀再用缓冲液悬浮。发现绿色部分照光可放氧,如将两部分在暗处混合,加入14CO2,一定时间后,则14C被标记在六碳糖上。回答问题: (1)上述进一步实验说明什么?A.光合作用可分为需光和不需光两部分B.CO2
8、固定是不需光的C.氧的释放要光D.水的氧化要光E.水的还原要光F.光产生还原剂G.还原剂用于CO2还原H.光通过叶绿体起作用I.六碳糖可氧化产生CO2回答问题: (1)上述进一步实验说明什么?A.光合作用可分为需光和不需光两部分B.CO2固定是不需光的C.氧的释放要光D.水的氧化要光E.水的还原要光F.光产生还原剂G.还原剂用于CO2还原H.光通过叶绿体起作用I.六碳糖可氧化产生CO2回答问题: (2)实验中能否用NaH14C
