现代组织化学---组织化学

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1、现代组织化学技术(ModernHistochemicalTechnology)华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室李宏莲1、经典组织化学2、免疫组织化学3、原位杂交组织化学现代组织化学的内容组织化学(也称细胞化学)（Histochemistryorcytochemistry）一、组织化学的基本概念（一）组织化学的提出（二）组织化学的定义在保持组织或细胞基本上不改变其生活状态时的微细结构的条件下，采用显微镜技术观察某些化学成分或酶活性在组织或细胞内的定性、定位和定量及其变化规律定性，定位，定量;组织原位，显微镜铅法（ATP酶）HE染色醛复红染色HE染色（三）组织化学的基本原理化学反

2、应化学试剂+拟检物质反应产物沉淀（有色）（组织切片或细胞涂片）（拟检物质所在处）一、组织化学的基本概念（四）组织化学技术的用途一、组织化学的基本概念1.某些离子:钙离子、铁离子、磷酸根离子等2.糖类:过碘酸希父反应（PAS反应）可以显示多糖和糖蛋白的糖链糖多醛紫红色反应产物过碘酸品红硫酸复合物无色，即希夫试剂（四）组织化学技术的用途一、组织化学的基本概念3.脂类:甲醛固定，冰冻切片，用油红O、尼罗蓝或苏丹类脂溶性染料染色，可呈现相应颜色4.核酸:DNA显示：福尔根反应——稀盐酸水解DNA，再用希夫试剂处理，形成紫红色产物DNA和RNA同时显示：甲基绿---派若宁儿茶酚胺、蛋白质、氨基酸等等

3、5.酶类:通过显示酶的活性来检测酶的存在。常用光镜酶组织化学显示法反应原理酶组织化学基本反应原理酶特异性底物+相关捕获剂反应产物沉淀（有色）反应产物沉淀（无色）+置换剂酶（孵育液内）（组织细胞内）镜下观察有色沉淀R-PO4Na2+H2OR-OH+CaHPO4CaHPO4Co3(PO4)2Co3(PO4)2CoS↓（显色）1、金属-金属盐显示法方法Ⅰ：钙-钴法CaCl2酶作用Co(NO3)2(NH4)2S（无色沉淀）1、金属-金属盐显示法方法Ⅱ：铅法R-PO4Na2+H2OR-OH+PbHPO4PbHPO4PbS↓（显色）酶作用Pb2+(NH4)2S2、偶联偶氮色素法I、同时偶联法：该法是孵

4、育液中的底物被酶分解后所产生的反应物沉淀立即与重氮盐形成重氮化合物的偶氮色素而显色。II、后偶联法：该法是为了防止重氮盐对酶的抑制作用，而先使酶作用于底物，使其分解产生反应物沉淀，然后将其浸渍于重氮盐溶液中，使其形成偶氮色素而显色。OPO2CaOHOHN≡NClβ-磷酸萘酚α-萘基氯化重氮盐不溶性偶氮色素N=NOH酶作用+3、色素形成法I、四唑盐法是指在孵育液中含有四唑盐或双四唑盐的酶作用底物，在脱氢酶的作用下，酶作用底物分离出氢原子，形成红色或蓝色的色素，即甲月朁（càn）或二甲月朁，它们沉着在酶作用部位，即酶的定位。C6H5—CN—N—C6H5N＝N—C6H5酶作用+2HC6H5—CN

5、—NH—C6H5N＝N—C6H5+HCl四唑盐(无色)甲月朁（红色）3、色素形成法II、靛酚蓝法：H3CCH3NNH3CCH3NNH2OH+酶作用+2H2O二甲基–对–苯二胺-萘酚靛酚几种酶的反应原理酸性磷酸酶碱性磷酸酶三磷酸腺苷酶乙酰胆碱酯酶细胞色素氧化酶一氧化氮合酶碱性磷酸酶（ALP）1、反应原理（钙-钴法）R-O-PO3Na2R-OH+H3PO4(β-甘油磷酸钠)H3PO4+CaCl2CaHPO4CaHPO4+Co(NO3)2Co3(PO4)2Co3(PO4)2+(NH4)2SCoS(棕黑色)2、孵育液的成分：3%β-甘油磷酸钠10ml2%巴比妥钠10ml2%CaCl220ml5%

6、MgSO41ml双蒸水5mlALPpH9.4酸性磷酸酶(ACP)1、反应原理（铅法）：R-O-PO3Na2R-OH+H3PO4(β-甘油磷酸钠)H3PO4+Pb2+Pb3(PO4)2Pb3(PO4)2+(NH4)2SPbS↓(棕黑色)2、孵育液的成分：0.05mol/L醋酸盐缓冲液（pH5.0）10ml3%β-甘油磷酸钠1ml蔗糖0.8mg硝酸铅10mgACPpH5.0三磷酸腺苷酶(ATPase)1、反应原理（铅法）：A—P～P～P+H2OA—P～P+H3PO4+能量(ATP钠盐)H3PO4+Pb2+Pb3(PO4)2Pb3(PO4)2+(NH4)2SPbS↓(棕黑色)2、孵育液的成分：A

7、TP二钠盐10mg0.2mol/LTris-HCl缓冲液（pH7.2）10ml0.1mol/LMgSO42.5ml2%Pb(NO3)21.5ml蔗糖0.8mg双蒸水5mlATPaseMg2+乙酰胆碱酯酶(AChE)1、反应原理（亚铁氰化铜法）：碘化乙酰硫代胆碱+H2O硫代胆碱+醋酸硫代胆碱+铁氰化物亚铁氰化物亚铁氰化物+Cu2+亚铁氰化铜↓(棕褐色）2、孵育液的成分：碘化乙酰硫代胆碱盐5mg0.1mol/L醋酸缓冲液（p