噬菌体Legendre的生物学特性及抗耐药结核潜力的初步研究

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1、噬菌体Legendre的生物学特性及抗耐药结核潜力的初步研究刘平邬亭亭彭丽郭述良*罗永艾（重庆医科大学附属第一医院呼吸科，重庆400016）[摘要]目的研究噬菌体Legendre的生物学特性并初步探索其用于抗耐药结核的潜力。方法双层平板法制备Legendre的噬菌斑，观察其特点，纯化噬菌体，电镜观察Legendre形态；提取Legendre基因组，限制性内切酶酶切分析确定其核酸类型；以不同感染复数扩增Legendre，找出最佳MOI和最小MOI；通过一步生长实验找出Legendre潜伏期、裂解期和裂解量；纯化Legendre颗粒，免疫家兔，获得抗血清，通过中和反应实验测定Legen

2、dre以及其它8种噬菌体和Legendre抗血清之间的吸附反应常数K值；采用单斑法测定Legendre的宿主谱；检测Legendre对紫外线、温度、氯仿、酒精、酸碱度的耐受性。结果Legendre的噬菌斑圆形透明，边界清楚，Legendre头部呈多面体立体对称，直径平均为65nm，尾长平均为215nm；基因组核酸能被双链DNA内切酶EcoRⅠ，HindⅢ及BamHⅠ切开，大小约65kb；Legendre最佳MOI为10-4，最小MOI为10-3，Legendre对耻垢分枝杆菌极度易感；Legendre感染宿主菌的潜伏期为180min，裂解期为120min，裂解量为13；Legend

3、reK值为697，Legendre抗血清对非对应噬菌体的中和活性有差异，对DNAⅢ、Bo4、Clark、Sedge、Leo高，对TM4、D29中和活性较低；Legendre能裂解耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株、多数临床耐药株；Legendre对紫外线、温度、氯仿、酒精、酸碱度均敏感。结论Legendre属于长尾噬菌体科，双链DNA噬菌体，抗原性低，宿主谱广，具有抗耐药结核潜力。[关键词]Legendre；耻垢分枝杆菌；结核分枝杆菌；生物学特性；耐药结核病[中图分类号]R52TheBiologicalCharacteristicsofMycobacteriophageLegendr

4、eandItsPotentialsinDrug-resistantTuberculosisControlLiuPing,WuTingting,PengLi,GuoShuliang*,LuoYongai(DepartmentofRespiratoryMedicine,theFirstHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400016,China)[Abstract]ObjectiveThispaperaimedtoresearchonthebiologicalcharacteristicsofmycobacteriophageL

5、egendretoexploreitsanti-drug-resistanttuberculosispotentials.MethodsTheplaquesmorphologicalpropertyofLegendrewasobservedbydouble-layerplatingandtheultrastructuerofLegendrewasobservedbyelectronmicroscopy.ThegenomeofLegendrewasextractedandthetypeofnucleicacidwasidentifiedwithrestrictionenzymeana

6、lysis.Legendrewasamplifiedbydouble-layeragarplatemethodindifferentmultiplicityofinfection(MOI)tofindtheoptimalMOIandthelowestMOI.Onestepgrowthexperimentwasdonetofindthelatentperiod,burstperiodandburstsizeofLegendre.TherabbitswereimmunedwithpurifiedLegendreparticlestoprepareanti-Legendreseruman

7、dcrossneutralizationtestwasdonetoexaminethereactionconstantkvaluesofLegendreandother8phages.ThehostrangeofLegendrewasexaminedbysingle-spotexamination.TheeffectofUVray,temperature,chloroform,alcohol,pHvaluesonLegendresurvivalwassurveyed.