动物细胞培养基本条件

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1、11.1动物细胞培养基的组成和制备11.2影响动物细胞培养的环境因素第11章动物细胞培养的基本条件11.1动物细胞培养基的组成和制备11.1.1动物细胞培养必需的溶液平衡盐溶液（BSS）：由生理盐水（无机盐）和葡萄糖制成，用于组织细胞的洗涤，也是配制各种培养液的基础溶液。其中无机离子具有维持细胞渗透势，调控培养液酸碱度平衡的功能。葡萄糖提供能量。酚红PH指示剂。Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液。培养基PH调整液：常用的有：3.7％、5.6％、7.4％的NaHCO3溶液和HEPES溶液（

2、二羟乙基哌嗪乙烷磺酸）等。BSS中试剂规格为GR或AR试剂，用三蒸水配制；配制后液体桃红色，PH7.4；避免钙、镁离子沉淀，要单独溶解；灭菌后丢失水分应补足；液体出现沉淀应重新配制。BSS溶液配制注意事项：动物细胞的培养基分类：天然培养基合成培养基无血清培养基11.1.2天然培养基天然培养基：直接取自动物体液或从组织中提取的天然成分作培养液，但成分复杂，来源有限。（1）血清：血浆去除纤维蛋白所得。营养丰富，其中溶有多种物质，如无机盐离子、蛋白质及氨基酸、糖类（如葡萄糖等）、脂类、激素、固醇、抗体、维生

3、素等。血清由于营养丰富，且含有多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物质，能使细胞顺利增殖生长，应用最广。缺点是组成复杂，使培养结果不稳定。常用新生犊牛血清和胎牛血清。（2）胚胎提取液：鸡胚、牛胚提取液，能促进细胞生长。来源有限。不常用。（3）水解乳白蛋白：是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解后的产物，含丰富氨基酸。用Hanks液配制成0.5%溶液，与合成培养基按比例混合使用。多用于细胞系和原代细胞的培养。（4）胶原：胶原是从动物真皮或大鼠尾腱中提取的，具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。11.1.3合成

4、培养基合成培养基是用化学物质人工模拟合成，种类相当多。合成培养基成分已知，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清，称为完全培养基。合成培养基，如109培养液、DMEM、TC199、RPMI-1640，MEM培养液等。合成培养基的组成：（1）氨基酸：氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分，12种必须氨基酸必须由培养液提供。需加一定量的谷氨酰

5、胺。（2）维生素：包括水溶性和脂溶性两类。一般由血清供应。（3）无机离子：包括大量和微量无机离子，通常也可由血清提供。（4）碳源：以葡萄糖为主。（5）其他：嘌呤、嘧啶、辅酶及抗氧化剂等。动物血清成分复杂，各种生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚，后期对培养产物的分离、提纯以及检测会造成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限，成本高，限制了它的大量使用。11.1.4无血清培养基无血清培养基不加动物血清，一般由基础培养基和替代血清的补充成分（细胞生长有效因子，激素等）两部分组成。可保证实验结果的

6、准确性和稳定性。但成本较高，针对性较强，一种无血清培养基只适用于某一类细胞的培养。（1）基础培养基根据不同培养细胞选择合适的合成培养基作为基础培养基。常用DMEM和F12以1：1比例混合作为基础培养基，用NaHCO3或HEPES溶液调整PH。（2）补充成分激素和生长因子：激素有胰岛素、生长激素和多种生长因子如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、增殖刺激因子、类胰岛素生长因子等。主要是刺激生长，维持细胞功能的作用。结合蛋白：主要是转铁蛋白（增强细胞摄取培养基中铁的能力，可螯合痕量有害金属离子）和白蛋白（参

7、与运载一些脂类、金属离子等，也有螯合过量微量元素的作用）两种蛋白。贴壁和铺展因子：帮助细胞贴壁和铺展。如纤黏蛋白、血清铺展因子、胶原等。微量元素和低分子量营养因子：硒元素、丁二胺、亚油酸等。酶抑制剂：常用大豆胰酶抑制剂。11.2影响动物细胞培养的环境因素（1）温度：哺乳动物最适温度36.5±0.5℃；对低温耐受性比高温强。（2）PH：7.2～7.4之间。低于6.8或高于7.6细胞生长受到影响，甚至死亡。偏酸性耐受较强，偏碱性很快死亡。（3）气体：O2；CO2，还可调节PH。（4）渗透势：不同细胞要求不

8、同。思考题概述BSS的组成和用途。动物细胞的培养基主要有哪几类？各有何特点？动物细胞培养的完全培养基和植物细胞培养基在组成上有何异同？为什么要开发无血清培养基？常用的血清替代成分主要有哪几类？最常用的补充因子是哪几种？概述各种环境因素对动物细胞培养的影响。