实验五sds-page蛋白质电泳准备实验

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1、实验五SDS-PAGE蛋白质电泳准备实验----------溶液的配置实验内容一、变性蛋白质电泳系列溶液1、单体母液（第一小组）25ml丙烯酰胺7.50g甲叉双丙烯酰胺0.20g去离子水定容至25ml,定性中速滤纸过滤，棕色试剂瓶4℃存放。2、10％(w/v)SDS（第一小组）10mlSDS1.0g去离子水10ml3、分离胶缓冲液（4×，pH=8.80，25ml）（第二小组）Tris-Base(1.5mol/L)4.54g10％(w/v)SDS1ml用20ml去离子水溶解，再用浓HCl调节pH到8.8，过滤，定容到25ml,4℃存放。4、浓缩胶缓冲液（4×，pH=6.8

2、0，50ml）（第二小组）Tris-Base(0.50mol/L)3.03g10％(w/v)SDS2ml加去离子水40ml溶解，用浓HCl调pH到6.80，定容到50ml，4℃存放。5、10％的过硫酸铵（1ml）（现配现用）（第三小组）过硫酸铵0.10g去离子水1.00ml,4℃密闭存放。6、电极缓冲液(pH=8.30)500ml(1×)）（第三小组）Tris-Base1.5g甘氨酸6.25gSDS(10%)2.5ml去离子水溶解。7、样品缓冲液储液（2×）（第四小组）2.5ml浓缩胶缓冲液（4×）1.25mlSDS（固体干粉）0.1g甘油0.5ml溴酚兰1mg加去离子

3、水0.75ml溶解，加50ul巯基乙醇，室温保存。8、染色液400ml考马斯亮兰R－2501.0g甲醇182ml冰醋酸36.8ml水182ml9、脱色液（第四组）500ml甲醇228.00ml冰醋酸36.00ml水236.00ml表3分离胶的配制Table3Theconfectofseparatinggel胶浓度12％单体母液（ml）9.60去离子水（ml）8.40分离胶缓冲液（ml）6.0010％APS（μl）100TEMED(μl)36表4浓缩胶的配制备Table4Theconfectofconcentratinggel胶浓度5％单体母液（ml）0.75去离子水（m

4、l）3.00浓缩胶缓冲液（ml）1.2510％APS（μl）40TEMED(μl)12