安捷伦HPLC1260操作流程

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1、安捷伦1260型HPLC操作流程主要内容仪器的组成操作前准备开机及关机工作站使用数据分析注意事项仪器的组成主体安捷伦1260HPLC流动相瓶、四元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器附件电脑、显示器、打印机等仪器的组成安捷伦1260HPLC流动相瓶四元泵自动进样器柱温箱二极管阵列检测器仪器的组成四元泵自动进样器柱温箱二极管阵列检测器排气阀流动相瓶电源开关指示灯色谱柱操作前准备流动相选择流动相过滤流动相超声与脱气流动相冷却操作前准备流动相选择分类：组成分-单组分和多组分极性-极性、弱极性、非极性常用溶剂：甲醇、

2、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等（溶剂最好为HPLC级，水为超纯水）其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相，通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效果。操作前准备流动相过滤为了除去流动相中的杂质,保护系统和色谱柱，在流动相使用完后，装入新的溶剂前应使用抽滤瓶对溶剂进行过滤。滤膜滤膜：有机膜和水系膜，二者不能混用。一般HPLC流动相过滤使用孔径为0.45m的滤膜。针对混合溶剂首选有机滤膜过滤。操作前准备流动相超声与脱气为了除去溶解

3、在流动相中得气泡,降低基线噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声30min左右。对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。操作前准备流动相冷却流动相在超声机中长时间超声后，由于水分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中的溶剂也会被加热。加热后的流动相进入液相系统和色谱柱后，会影响基线噪声的增加，使平稳时间延长。开机及关机1260HPLC及化学工作站开机使用与关机打开计算机打开主机电源点击仪器1联机进入工作站排气（A/B/C/D）调节

4、流速与流动相比例关闭排气阀打开柱温箱逐步增大流速检查压力稳定后打开检测器跑基线稳定后清洗针与管路样品命名进样检测保存数据冲洗管路及关机开机及关机关机前，用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量1.0mL/min，再用100%有机溶剂（甲醇）冲0.5小时，然后保存方法和仪器设置。退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。关掉液相主机各模块电源开关，拔掉电源插头。做好仪器使用登记。工作站使用进入工作站主界面方法和各模块参数设置跑基线样品命名与进样检测工作站使用进入工作站工作站使用主界面工作站使用方法和各模块参数设置

5、在各模块中空白处点击右键，选择“方法”编辑参数。仪器方法设置仪器方法设置1bar≈14.5psi≈0.1MPa=100kPa不同仪器单位不同仪器方法设置仪器方法设置工作站使用视图→在线信号→信号窗口1工作站使用跑基线至少平稳30min工作站使用单次样品：样品命名工作站使用序列样品：命名与序列表设置工作站使用进样检测样品色谱图数据分析进入仪器1脱机打开数据文件夹打开样品色谱图色谱峰编辑色谱峰数据打印报告色谱峰实例数据分析打开仪器1脱机数据分析数据文件夹序列样品数据单次样品数据样品数据色谱图色谱图编辑色谱峰数据数据分

6、析色谱峰手动积分数据分析报告→打印报告主峰数据主峰要求：分离度﹥1.50.95≤对称因子≤1.05塔板数8000以上数据分析患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图环己烷羧酸丙戊酸钠空白标准品色谱峰实例注意事项氘灯是易耗品，分析前应最后开灯，不分析样品应及时关闭氘灯；注意事项流动相不要使用多日存放的蒸馏水，一般不易超过三天（易长菌），影响基线平衡；仪器使用后，应用90%水冲洗柱子和系统0.5-1h，流量1.0mL/min，再用100甲醇冲洗0.5h；注意事项开机时，打开排气阀，设置流动相为100%水，泵流量5.0mL/mi

7、n，若此时显示压力＞10bar，则应更换排气阀里的过滤白头。注意事项流速突然变大或突然变小会导致柱压的突然改变，时间久了柱子填料会坍陷或松动，最终柱压下降，所以泵开始和结束前要注意缓慢改变流速。谢谢！