薄层色谱及其在药物分析的应用

《薄层色谱及其在药物分析的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、薄层色谱及其在药物分析中的应用1薄层色谱（Thinlinerchromatography,TLC）概况1.1薄层色谱分类1.1.1按机理分类：吸附薄层，分配薄层，离子交换薄层，凝胶薄层1.1.2按分离效能：经典薄层，高效薄层（HPTLC）1.2.薄层色谱的特点1.2.1.设备简单，操作方便，快速。1.2.2.与纸色谱比较，斑点扩散少，检出灵敏度高10～100倍。1.2.3.可以使用腐蚀性显色剂，如浓硫酸，浓盐酸等。1.2.4.可以同时分析多个样品，无交叉污染。1.2.5.流动相选择范围大。1.2.6.为一次性板，对前处理要求不高。

2、薄层色谱与高效液相色谱方法比较（1）比较项目薄层色谱准确性相当相当重复性相当相当灵敏度相当相当特效性相当相当有效分析时间（少）较长较短有效分析时间（多）较短较长流动相流量控制不是关键是关键检测波长下溶剂的影响无大对全部被分离组分的检测方便局限性大吸附剂再生不要求关键薄层色谱与高效液相色谱方法比较（2）时间有效利用方便方便对污染物抗受力颗粒物质无影响影响大腐蚀性物质无影响影响大不可逆吸附物质无影响有影响自动样品处理可以可以色谱后衍生方便、便宜受限、昂贵操作成本低高在线光谱图记录可以可以进一步发展潜力大较小2.薄层色谱吸附剂2.1硅胶

3、（Silicage）：具有表面活性，略带酸性。硅胶G,硅胶H,硅胶GF2542.2氧化铝（Aluminumoxide）：具有表面活性，略带碱性（pH8～10）；酸性（pH4）；中性（pH7～7.5）2.3纤维素(Cellulose)：是一种天然多糖类，，主要用于液-液分配薄层色谱担体，其固定液一般就是从环境中吸附的水，通常不需加黏结剂。纤维素匀浆的配制：纤维素与水以1：5～6的比例混合均匀，即可涂布。纤维素薄层干燥后的厚度只有涂布厚度的一半，2.4硅藻土(Diatomaceous)：中性吸附剂，主要用于分配薄层色谱中的担体。主要成

4、分使硅胶。用时需要纯化。2.5葡聚糖凝胶（Sephadex）：铺板：以适量溶剂，如水、二甲亚砜或乙二醇进行溶胀，薄层厚度0.4～1.0mm。配制参数见下表：葡聚糖凝胶配制参数凝胶型号（粒度25um）凝胶量(g/100ml)最少溶胀时间（h）室温沸水浴SephadexG-5010.531SephadexG-757.5242SephadexG-1006.5723SephadexG-1504.8723SephadexG-2004.57232薄层吸附剂2.6聚酰胺：属有机薄层材料，常用的时聚己内酰胺（聚酰胺6）和聚十一酰胺（聚酰胺11）适

5、合分离含酚羟基、羧基、氨基酸等结构和基团的化合物，选择性较高。聚酰胺板制备：16g聚酰胺粉末与65ml蒸馏水，充分振动；或16g聚酰胺粉末与65ml甲醇混匀。薄层板于室温下干燥。注意：A刚涂布的薄层板不能立即活化。B不是活度越高越好。如硅胶板当含水量为0时，活度太强。反之，当硅胶含水高于17%，氧化铝含水高于6%时，则活性太低，分离效率低。下表是活性级别与含水量的关系。活性级别与含水量的关系布罗克曼活性级活性强弱薄层材料含水量（W/W%）硅胶氧化铝1强002533156425105弱3815吸附剂选择原则6.1.1酸性物质一般用酸

6、性或中性，如硅胶，酸性或中性氧化铝。6.1.2极性大的物质用低活性吸附剂，反之，则用高活性吸附剂。6.1.3常用的吸附剂吸附强弱顺序：硅胶》氧化铝》硅藻土（适合分离极性物质）3.载板3.1.载板要求：化学惰性一定的强度表面光滑、平整厚度均匀价格便宜3.载板3.2.载板种类：玻璃板聚酯箔铝箔3.3.薄层预制板4薄层色谱点样点样的一般要求：溶剂、点样量、点样器、原点大小4.1手工点样：定容毛细管（1μl～5μl）CamagCo,DrummondScentifinCo4.2自动点样：手工点样缺点：精度差，时间长，不易操作。喷样仪：Cam

7、ag公司生产，为条带状喷样系统，基本实现自动化。优点：适合于较大量稀样品溶液的喷加，通过加大点样量降低了检测限。条状色谱图更方便于狭逢式扫描，系统误差小。自动点样仪：Camag生产，是一种适合定量分析的全自动点样仪，液既可以点点状斑点，也可以点条状斑点。5薄层色谱的展开5.1多次展开：目的是增加有效分离距离。经多次展开后的Rf值可由下式计算：Rfn=1-(1-Rf)n5.2分步展开：几种展开剂从低极性到高极性依次展开。5.3连续展开：使流动相沿薄层连续流动。目的是增加有效分离距离。由于没有展开前沿，故需对照物做参照。5.4二维展开

8、：沿2个垂直的方向分别展开。方法：将被分离的样品点于薄层板的一个角上，展开到一定距离后，将薄层板取出，挥干溶剂，再将薄层板沿原方向垂直方向展开。5.5离心展开：大大提高分离速度，用于制备色谱。5.6梯度洗脱展开和梯度薄层5.7多维展开、加压展开、控