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1、藏红花愈伤组织诱导 及固液两步法合成藏红花素唐芸芸生物技术2007.6.13一、论文的选题背景二、论文的研究方法三、论文后的收获四、创新和不足之处论文选题背景藏红花的生长发育期长。藏红花生长的环境条件要求苛刻。藏红花只开花不结果，繁殖困难。藏红花产量低。藏红花的生物学特性主要鉴于论文选题背景藏红花资源现状藏红花资源紧缺，在我国,藏红花只有少量分布,主要集中在西藏、浙江、江苏、上海等地，其于地方属于藏红花限制性气候因素。藏红花研究现状研究学者对藏红花的组织培养和利用藏红花愈伤组织生产次生物质研究较少。论文的研究方法试验材料及方法步骤球茎提前
2、出芽的结果MS培养基对不同外植体愈伤组织诱导率的影响不同培养基的对同种外植体愈伤组织诱导率的影响不同的激素配比对同种外植体愈伤组织诱导率的影响。浅述了固液两步法合成藏红花素方面的问题材料与方法试验材料：外植体:叶片包括幼叶(初冬刚出苗时叶片)和老叶(初春叶片)；芽包括幼芽(球茎上的芽)和嫩芽(球茎幼芽生长约lcm左右时的芽)；球茎。材料与方法试验方法：消毒灭菌：将不同的外植体于自来水中冲洗干净，放入75%酒精中摇动30s，再以0.1%HgC12溶液中消毒8min，无菌水冲洗四次，彻底洗去残余HgC12，滤纸吸干。接种：在超净工作台上将消毒
3、后的外植体切片(块)：叶片分叶尖、叶中部和叶基部，切约0.5cm2左右；芽分为幼芽和嫩芽，分别切成小片；球茎切成小块，分别接种。材料与方法试验方法：培养条件:诱导培养基的种类为MS,B5,White，激素浓度范围2，4-D0.1-5mg/L，BAP0.1-3.0mg/L。球茎提前出芽方法:将5～6月处于休眠时期的藏红花球茎,放置于人工气候箱中,光照强度2560lx；每天光照时间为10h；温度(20±0.3)℃；湿度为80%。每天黑暗时间为14h；温度(18±0.3)℃；湿度为80%。在此条件下培养1个月。结果与分析球茎提前出芽的结果:藏红
4、花球茎的生长条件需要适宜的温度、湿度、光照强度。采用人工气候箱培养,上述各种指标均可人工进行调节，而且比较稳定，可以加湿并能够自动调节湿度,满足藏红花的生长需要的各种环境。试验结果表明在人工气候箱中培养藏红花比在一般培养箱中提前1个月发芽。结果与分析MS培养基对不同外植体愈伤组织诱导率的影响:由表1可见,叶片、芽和球茎均可诱导产生愈伤组织，诱导率最高达99%。不同生长时期叶片的诱导率差异明显，初冬刚出幼叶，诱导率较高，叶片老化后，诱导率明显下降，同一叶片的不同的部位(近叶尖、叶中部和叶基部)，诱导率差异不明显。幼芽、嫩芽的诱导率均高达97
5、%，球茎的诱导率77.1%。结果与分析不同培养基种类对愈伤组织诱导率的影响:由表2可见，三种不同培养基添加一定的激素均可诱导幼叶产生愈伤组织，并且诱导率高达98%以上。培养基对藏红花愈伤组织的诱导率和愈伤组织的形态都有一定的影响。MS培养基中，愈伤组织出现的时间最早,诱导率最高,诱导的愈伤组织为大的块状,黄色或白色,生长快,又不容易褐化。White和B5培养基具有诱导率较低、部分容易褐化等缺点。结果与分析不同激素配比对愈伤组织诱导率的影响：由表3可见，不同的激素配比均可诱导幼叶产生愈伤组织，并且诱导率均在80%以上，其中当2,4-D2.0
6、mg/L,BAP0.1-0.5mg/L时，诱导率均在95%以上，可以大量形成幼叶愈伤组织，激素配比以2,4-D2.0mg/L,BAP0.1-0.5mg/L为宜。结果与分析表1MS培养基对不同外植体愈伤组织诱导率的影响外植体接种快数出愈快数诱导率%叶片芽幼叶（初冬）老叶（初春）幼芽嫩芽球茎86010002403001500852308234292115699.131.097.597.377.1结果与分析表2不同培养基种类对愈伤组织诱导率的影响培养基接种块数出愈块数诱导率%愈伤组织的形态MS50049699.2块状;黄色或白色;生长最快,部分
7、容易褐化White50049198.2块状;黄色或白色;生长较快,部分容易褐化B550049298.4颗粒或块状;黄色或白色;生长较快,容易褐化结果与分析表3不同培养基种类对愈伤组织诱导率的影响BAP（mg/L）2,4-D(mg/L)0.10.51.02.03.00.183.985.080.282.983.50.592.892.083.090.182.31.097.297.192.791.791.52.099.598.195.995.896.23.095.793.092.893.293.84.091.792.191.593.592.65.
8、087.690.688.589.392.6讨论实验解决的问题：本文在藏红花的愈伤组织诱导方面，以叶片、芽、球茎作为不同外植体，分别获得了较高的诱导率。实现了不同外植体的定向培养，即在一定的条件
