TriZOL小量法制备RNA

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1、Mini-preTotalRNAwithTriZOL幼嫩组织若干，液氮研磨，分装成＜100mg小份至预冷E.P.管100mg样品加入1mlTriZOL抽提几分钟（颠倒混匀）12,000g、2~8℃离心10min吸取上清（含RNA），转移至新的1.5mlE.P.管中HomogenizationPhaseSeparation此前可于―70℃放置1月再抽提15~30℃放置5min加0.2ml(1/5VTriZOL)氯仿，充分抽提15sec.15-30℃放置2~3min形成上层无色水相、中间相和下层有机相≤12,000g、2~8℃离心15min中间相和有机相可用于DNA和蛋白质抽提吸取上

2、清，转移至新的1.5mlE.P.管中加0.5ml(1/2VTriZOL)异丙醇15-30℃放置10minRNAPrecipitationRNARedissolvingRNAWash≤12,000g、2~8℃离心10min小心弃去上清，得胶体状RNA在75%乙醇中，RNA沉淀可于2~8℃放置1周、―5℃~70℃放置1年加1~1.5ml(≥1VTriZOL)75%乙醇，涡旋混匀≤7,500g、2~8℃离心5min小心弃去上清，留下胶体状RNA过干会使RNA难以溶解干燥5~10min溶于RNase-free水中，枪头打匀，55-60℃温浴10min1.5%Agrose胶检测测定浓度进一

3、步纯化2所需试剂及用品：液氮氯仿异丙醇DEPC75%乙醇（DEPC处理的水配制）RNase-free水1.5ml离心管1ml、0.2ml、0.1ml、0.01ml枪头各若干玻璃及塑料制品的处理：（均可用0.5%NaOH浸泡15min，用ddH2O冲洗干净，灭菌备用。）玻璃器皿：150℃烘烤4hrs塑料制品：离心管和枪头用含DEPC的ddH2O浸泡过夜，烘干，灭菌备用。或者：0.5MNaOH浸泡10min，用ddH2O冲洗干净，灭菌。RNase-freeddH2O：ddH2O+DEPC过夜（0.01~0.05%），灭菌备用。仪器：台式高速冷冻离心机或者：大型高速冷冻离心机

4、磨样用具Note:1.Alwaysweardisposablegloves.2.Usesterile,disposableplasticwareandautomaticpipettesreservedforRNAworktocross-contaminationwithRNasefromsharedequipment.3.DownstreamhandlingoftheTriZOLrequiresthatnondisposableglasswareorplasticwarebeRNase-free.4.Safetycare.2