生物基因工程的基本操作程序

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1、基因工程的基本操作程序1.2基因工程的基本操作程序1.目的基因的获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定什么叫基因？基因－－有遗传效应的DNA片段。什么叫遗传效应？遗传效应－－能转录为mRNA，继而翻译为蛋白质；能转录为核糖体RNA；能转录为转运RNA。基因工程的目的基因－－从供体转移到受体的基因。与生物抗逆性相关的基因与优良品质相关的基因与生物药物和保健品相关的基因与毒物降解相关的基因与工业所需酶相关的基因具有调控作用的因子……？1、获取目的基因的常用方法有哪些？2、什么叫基因文库，它包括

2、哪些种类？3、用PCR技术扩增基因需要哪些原料？1、从基因文库中获取一、目的基因的获取获取目的基因常用的方法2、利用PCR技术扩增3、人工合成1、从基因文库中获取一、目的基因的获取1)、基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的许多，导入的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。DNA片段受体菌（2）基因文库种类基因组文库：部分基因文库：含有一种生物所有的基因含有一种生物的一部分基因，如：cDNA文库基因组文库与部分基因文库的关系①基因组文库的构建基因文库的构建方法通过对受体菌的培养而储存基因鸟枪法（直接分离法）用限

3、制酶切成许多片断该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。基因文库的构建方法cDNA文库的构建——反转录法：mRNA反转录cDNA(互补DNA）DNA聚合酶双链DNA基因重组反转录酶mRNAcDNA↓↓↓↓↓基因组文库的建构过程：P10cDNA文库的建构过程：P10↓↓↓↓↓供体细胞中的DNA许多DNA片段表达载体受体细胞外源DNA扩增，产生特定性状目的基因目的基因的mRNA单链DNA双链DNA载体受体菌群(cDNA文库)目的基因限制酶连接导入分离反转录合成插入导入分离基因

4、组DNA文库cDNA文库基因组DNA文库与cDNA文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子有无基因中内含子基因多少物种间的基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以基因组文库和部分基因组文库的比较怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢?从基因组文库中获取目的基因的方法目的基因的有关信息依据：如：1、根据基因的核苷酸序列2、基因的功能3、基因在染色体上的位置4、基因的转录产物mRNA5、基因翻译产物蛋白质等特性利用PCR技术扩增目的基因：①原理：。②前提条件：有一段已知目的基因

5、的，以便根据这一序列合成。③条件：DNA模板、、和4种脱氧核苷酸（dNTP）、以及某些离子。DNA复制核苷酸序列引物热稳定DNA聚合酶引物2、PCR技术概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术④扩增过程：受热引物热稳定DNA聚合酶以指数方式扩增，即2n（n为扩增循环的次数使目的基因在短时间内成百万倍地扩增（5）方式：（6）结果：5’5’3’3’5’3’5’3’DNA聚合酶DNA连接酶DNA复制的条件：模板DNA、脱氧核苷酸、解旋酶、引物酶、DNA聚合酶、DNA连接酶引物高温变性中温延伸

6、低温复性PCR加热变性退火复性延伸PCR循环PCR技术PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增⑥过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链DNA复制PCR技术区别解旋方式场所酶温度条件合成对象联系PCR技术与生物体内DNA复制的比较解旋酶催化DNA在高温作用

7、下变性解旋细胞内（主要在细胞核内）细胞外（主要在PCR扩增仪内）DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶细胞内温和条件需控制温度，在较高温度下进行DNA分子DNA片段或基因1模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成;2原料：均为四种脱氧核苷酸；3酶：均需要DNA聚合酶进行催化；4引物：均需要引物，使DNA聚合酶从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸耐热的DNA聚合酶（Taq聚合酶）3、人工合成法：——根据已知的氨基酸序列合成DNA蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成方法基因组文库的构建PCR

8、技术扩增人工合成基因组文库部分基因文库（如cDNA文库）优点缺点操作简单专一性强可在短时间内扩增大量目的基因专一性强，可产生自然界中不存在的新基因工作量大、盲目性大、转移性差操作过程较麻烦，技术要求过高需要严格控制温度、技术要求高适用范围小提取目的基因方法的比较二、基因表达载