革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌检验

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1、微生物检验技术刘垣第六章革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌检验重点各菌属生物学特性及临床意义。难点各菌属微生物学检验重点难点目录一、肠杆菌科二、弧菌科三、非发酵革兰阴性杆菌四、其他革兰阴性苛养菌肠杆菌科第一节概述肠杆菌科（Enterobacteriaceae）细菌是一大群形态、生物学性状相似，需氧或兼性厌氧的革兰阴性杆菌或球杆菌在自然界中广泛分布，可栖生在人和动物的肠道内，多数为条件致病菌，少数为致病菌致病菌：沙门菌、志贺菌、耶尔森菌等条件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸橼酸杆菌、肠杆属菌、沙雷菌、变形杆菌等与医学的关系分类1）

2、形态与染色革兰阴性杆状或球杆状细菌，无芽孢，多数有鞭毛，能运动，少数细菌有荚膜或包膜，有致病性的菌株多数有菌毛共同特性2）培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基如血琼脂和麦康凯培养基上容易生长，大部分菌属在22~35℃生长良好大肠埃希菌菌落特征（血平板）大肠埃希菌菌落特征（MAC）SS培养基（沙门志贺培养基）乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂强选择培养基大肠埃希菌产酸桃红色乳糖发酵菌落伤寒沙门菌无色乳糖不发酵菌落胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌，提高肠道致病菌检出率乳糖发酵中性红呈红色乳糖不发酵EM

3、B（伊红美蓝培养基），乳糖、伊红、美兰弱选择培养基大肠埃希菌（非致病菌）乳糖发酵产酸伊红结合美蓝形成紫黑色金属光泽化合物有色的乳糖发酵菌落伤寒沙门菌等（致病菌）乳糖不发酵伊红美蓝不能结合无色的乳糖不发酵菌落3)生化反应非常活泼。发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原阳性4）抗原结构：O抗原菌体抗原H抗原菌毛抗原表面抗原5）变异性多样。如S-R变异、H-O变异，生化反应变异、耐药性变异6）抵抗力不强。加热60℃30min既被杀死，对干燥、化学消毒剂敏感、耐低温、耐胆盐、煌绿（可抑制非致病菌）临床

4、意义（一）肠道外感染除志贺菌外，多数肠杆菌科细菌均可引起肠道外感染，且往往为获得性的感染鼠疫耶尔森菌可引起自然疫源烈性传染病鼠疫，伤寒沙门菌可经粪口传播引起血流感染（二）肠道内感染是人和动物肠道感染的重要病原菌。比较明确的肠道病原菌有埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶尔森菌属等微生物检验KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋――第二节埃希菌属埃希菌属主要有5个种，1）大肠埃希菌临床最常见2）蟑螂埃希菌3）弗格森埃希菌4）赫尔曼埃希菌5）伤口埃希菌一、生物学特性形态与染色为革兰阴性短杆状，多数有周鞭毛和菌毛培养

5、特性兼性厌氧，营养要求不高，在血琼脂平板上某些菌株可产生β-溶血，在SS琼脂平板上少数菌株可发酵乳糖，形成粉红色菌落。在麦康凯平板上菌落呈粉红色。在伊红美蓝琼脂平板上呈有金属光泽的紫黑色菌落。在液体培养基中，呈浑浊生长一、生物学特性生化反应特征：发酵多种糖，产酸、产气KIA产酸/产酸、产气IMViC中4个试验的结果为＋＋――MIU中3个试验结果为＋＋―氧化型发酵型产碱型阳性:红色阴性:淡黄色硝酸盐还原实验OF实验一、生物学特性4.抗原构造1)O（菌体）抗原：脂多糖，耐热2)H（鞭毛）抗原：蛋白质，不耐热3)K（表面）

6、抗原：荚膜多糖，耐热，能阻止O抗原凝集反应一、生物学特性5.抵抗力自然状态下较强。加热60℃30min既被杀死，耐低温，对常用化学消毒剂敏感、对胆盐、煌绿有选择性抑制作用，对链霉素、卡那霉素等敏感，但易耐药二、临床意义1.致病因素1）侵袭力：K抗原和菌毛与侵袭力有关。K抗原有抗吞噬作用，菌毛有黏附作用2）内毒素：细胞壁上的脂多糖（LPS）3）肠毒素：大肠埃希菌可产生两种肠毒素：一种是不耐热肠毒素（LT）；另一种是耐热肠毒素（ST）二、临床意义2.所致疾病1）肠道外感染大肠埃希菌是临床分离的革兰阴性杆菌中最常见的菌种，

7、可引起各种类型的感染，主要是引起人类泌尿系感染肠道外感染（多为内源性感染）化脓性感染——定位转移腹膜炎、阑尾炎、创伤感染、手术刀口感染等泌尿道感染——病原菌来自病人肠道（上行性）占泌尿道感染首位、女性多见（尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎等）二、临床意义2）肠道内感染是人和动物肠道的正常菌群，但其中有些菌株能引起轻微腹泻至霍乱样严重腹泻，根据其不同的血清型别、毒力和所致临床症状的不同，将引起人腹泻的大肠埃希菌分为5类：三、微生物学常规检验1.标本采集肠外感染的标本：取血液、痰液、脓液、分泌物等肠内感染的标本：取腹泻和食物中毒

8、者的粪便、肛拭和残留食物三、微生物学常规检验2.肠道外感染标本的常规检验１）检验程序２）检验方法　　直接检查→分离培养→鉴定（KIA、MIU）3.肠道内感染标本的常规检验1)分离培养：选择培养基2)鉴定：生化反应、血清学试验、毒素或毒力试验第三节沙门菌属案例一男性病人，高热10天，有纳差、腹部不适、全身酸痛的前驱症状。腹部有压痛，肝脾肿大。肥达