单克隆抗体论文

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1、此技术是1975年Kohlor应用细胞杂交瘤技术，将致敏的淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤，而产生同源抗体，因为此杂交瘤细胞既保持了瘤细胞增生的特性，又保持了分泌抗体的特性，能产生无限量的同源单克隆抗体。这些抗体有相同的结构和较为均一的理化性质，能对抗原大分子的决定簇有较高的分辨能力，特异性强，所以称之为生物激光。’单克隆抗体除有很强韵特异性外，监可做为裁体；(1)可与毒素联接，如白喉类毒素，相思豆毒素与单克隆抗体联接制成抗体毒索联接物。上海细胞研究所研制有Meab一毒素联接物治疗肝癌取得初步疗效。(2)可与药物交联

2、，北京抗生索研究所将单克隆抗体与争光霉素结合成Meab一药物联接物，比单纯药物治疗增效12倍．(3)与脂质体联接，形成Meab～脂质体联接物，可以运载大量抗癌药分子集中在9中瘸部位。通过脂质体易于将药物进入肿瘤细胞，内技挥疗效。(4)Me曲与免疫调节剂联接。有报导干扰素与抗人成骨癌Me如连接可在体内增强自然杀伤细胞活性。所以单克隆抗体可做为生物导弹发挥更大的疗效。作用机理：多数认为是一种依赖抗体的细胞毒作用(ADC,G)]．效应细胞可能是表面携带Fc受体的单核或巨噬细胞。单克隆抗体杀伤肿瘤效应与其免疫球蛋自的亚群有关(因

3、效应细胞具有较多的Fc受体。)与亲和力无关．但与靶细胞所表达韵结合点的数目有关。1"-干扰索由于能增加效应细胞Fc受体及促进肿瘤抗原表达之能力，所以能增强杀伤效应。同时单克隆抗体对肿瘤的杀伤效应取决于效应细胞(单核或巨唑细胞)与肿瘤细胞之比观因此在肿瘤负荷较小时应用为好。、具体作用为通过融合形成杂交瘤分泌单克隆抗体，识别癌细胞上的盹瘤特异抗原，发生抗原抗体反应，杀伤癌细胞。和更进一步将药物，毒素，脂质体交联到单克隆抗体上，可以增强对癌细胞的杀伤能力。1获得抗体的传统方法及其缺点传统的抗体生产方法是向动物(如马、羊等)体内

4、反复注射某种抗原，即通过反复感染动物，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。如此得来的抗体产量低、纯度低，且制备的抗体特异性差，难免含有除所需抗体以外的多种其他抗体。2单克隆抗体的制备原理哺乳动物感染病原体(如病毒、细菌等)后，体内会形成相应的B淋巴细胞。B淋巴细胞能分泌抗体(这里的B淋巴细胞应理解为效应B细胞，即浆细胞)，凝聚或杀死这些病原体。动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上，但每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体(一个B淋巴细胞只能针对一种抗原决定簇产生一种特异性的抗体)。因此，

5、要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖(在体外培养条件下会很快死亡);骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性—既能在体外培养条件下不断增殖，又能产生出某种特异性的抗体3单克隆抗体的制备过程3.IB淋巴细胞及骨髓瘤细胞的获得给小鼠注射特定的抗原(如羊的红细胞)，使小鼠产生免疫反应，从产生免疫反应小鼠的脾脏细胞中得到了抗羊红细胞的抗

6、体，这说明在小鼠的脾脏细胞中形成了相应的B淋巴细胞。然后从免疫小鼠的脾脏中分离出B淋巴细胞。这里应明确，脾脏是人和动物体内最大的淋巴器官，是免疫细胞生成、成熟或集中分布的场所。提取并培养小鼠的骨髓瘤细胞获得大量的骨髓瘤细胞。3.ZB淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合用灭活的病毒或聚乙二醇、电激等诱导小鼠的骨髓瘤细胞与脾脏中产生的B淋巴细胞融合，结果得到3种类型的细胞:未融合的亲本细胞、融合的具有同种核的细胞、融合的杂交细胞。3.3杂交细胞的筛选在具有筛选作用的培养基上培养上述类型的细胞，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都

7、会死亡，只有融合的杂交细胞才能生长。该杂交细胞的特点是既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。3.4杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养融合后的细胞经选择培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来进行再一次筛选。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体(常用酶联免疫吸附试验法)，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有

8、限稀释，一般需进行3次一4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。这样，经过多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。3.5利用杂交瘤细胞生产抗体的方法将杂交瘤细胞(即上述专一抗体检验阳性的单克隆细胞)在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，这样，从细胞培养液或小