盐酸克仑特罗酶联免疫(ELISA)

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1、盐酸克仑特罗酶联免疫(ELISA)快速检测试剂盒盐酸克仑特罗酶联免疫(ELISA)快速检测试剂盒1概要盐酸克仑特罗（俗称瘦肉精）为一种人工合成的β肾上腺素兴奋剂，具有扩张支气管的作用，常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时，具有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，因此俗称为“瘦肉精”。在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善胴体的品质，同时也造成食品中盐酸克仑特罗（瘦肉精）的残留。当人们食用盐酸克仑特罗残留的产品后会出现一系列的中毒症状。我国禁止在畜牧业中使用盐酸克仑特罗。本试剂盒可用于

2、定量、定性检测饲料、动物尿液以及动物组织等样本中盐酸克仑特罗的残留。2原理本试剂盒采用直接竞争ELISA法检测样本中的盐酸克仑特罗。在微孔板上预包被抗盐酸克仑特罗单克隆抗体，样本或标准溶液中的盐酸克仑特罗和HRP标记的盐酸克仑特罗竞争结合微孔板中抗盐酸克仑特罗单克隆抗体，洗涤后用H2O2-TMB底物系统显色，样本吸光度值与其所含盐酸克仑特罗量成负相关，与标准曲线比较即可得出盐酸克仑特罗含量。3试剂盒组份每个试剂盒中的试剂可进行96个测量（包括标准测定），试剂盒组份：包被有抗盐酸克仑特罗抗体微孔板96孔盐酸克仑特罗标准溶液1.5mL/瓶（6瓶）分别为0号：0ppb；1

3、号：0.1ppb；2号：0.3ppb；3号：0.9ppb；4号：2.7ppb；5号：8.1ppb盐酸克仑特罗-HRP标记物1瓶(6mL)20×浓缩洗涤液1瓶(50mL)底物溶液A1瓶(7mL)底物溶液B1瓶(7mL)终止液（含2M的硫酸）1瓶(6mL)封板膜3张说明书1份4另外所需试剂和仪器4.1试剂：—0.01MPBS（pH5.5-6.0）：称取8gNaCl，2.9gNa2HPO4·12H2O，0.2gKCl，0.2gKH2PO4，加超纯水溶解，调pH至5.5-6.0，定容至1000mL。—0.05MHCl：取0.83mLHCl（36%-38%），加超纯水定容至2

4、00mL；—1MNaOH：称取4gNaOH，加超纯水溶解后定容至100mL；—0.5MKH2PO4缓冲液（pH3.0）：称取6.8gKH2PO4加入80mL超纯水溶解后，用磷酸调节pH至3.0，加超纯水溶解后定容至100mL；—0.1MHCl：取0.83mL浓盐酸加去离子水混匀定容至100mL；—4％氯化钠：称取4g氯化钠加去离子水混匀定容至100mL；—4％氯化钠－0.1M盐酸混合液：量取70mL4％氯化钠溶液、20mL0.1M盐酸溶液和10mL超纯水（或双蒸水）混匀；4.2仪器—微孔板酶标仪（450nm）—天平（精度0.01g）—匀浆器—超声波清洗器—振荡器—离

5、心机和离心管—针筒式微孔过滤膜（0.45μm）—旋转蒸发器—氮气吹干仪—可调式20μL-200μL和100μL-1000μL微量移液器5样本处理5.1尿液试样的处理尿液不用处理，可直接取100μL进行检测（如果尿液混浊，建议实验前先进行10000rpm离心5min或过滤，用上清检测）。5.2肌肉、脏器等动物组织试样的处理5.2.1方法一取5g（精确到0.05g）粉碎匀浆的样本，加入25mL0.05MHCl，振荡混匀20min；称取6g均质物(相当于1g样本)加入离心管中，10-15°C4000rpm离心15min；取上清到另一试管中，加入300μL1M的NaOH，混

6、合10min；加入4mL0.5MpH3.0的磷酸二氢钾缓冲液，混合后在4°C放置至少1.5h或过夜；在10-15°C4000rpm离心15min，吸取全部上清，室温放置，待回温后用RIDAC18柱纯化附：RIDAC18柱纯化用3mL无水甲醇洗涤C18固相萃取柱，然后用2mL0.05MpH3.0磷酸-磷酸二氢钾缓冲液淋洗（注意：控制流速在1滴/s）。将处理好的样品液全部过柱（注意：样品上柱时控制流速在15滴/min），再用2mL50mMpH3.0磷酸-磷酸二氢钾缓冲液淋洗萃取柱，用洗耳球将柱吹干。用2mL无水甲醇洗脱，收集洗脱液，于50～60°C下用氮气缓缓地吹干。用

7、1mL0.01MPBS（pH5.5-6.0）溶解残留物，取100μL进行检测。5.2.2方法二称取2g（精确到0.02g）均质样品于50mL离心管中，加入6mL4％氯化钠－0.1M盐酸混合液，漩涡混合器充分混合，静置20min，10000rpm离心5min。取1mL上清液加入1MNaOH调节pH5.5-6.0之间，取100μL进行检测。5.3饲料试样的处理称2g（精确到0.02g）粉碎饲料样本，加入2mL1M盐酸溶液，加入16mL去离子水混匀，漩涡混合器充分混合15min。10000rpm离心5min，转移9mL上清于另一个离心管，并加入1mL1M氢氧化钠溶液，