嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化研究

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1、※生物工程食品科学2007,Vol.28,No.12305嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化研究王武1,2，付敏1，唐晓明1，潘见2,*(1.合肥工业大学生物与食品工程学院，安徽合肥230009；2.农产品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009)摘要：本实验对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化进行了研究。嗜酸乳杆菌的粗酶液经40%～80%饱和度的硫酸铵盐析、透析、SephadexG-100凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化后，酶的纯化倍数达到3.10，比活力为475.75U/(mg蛋白质)；纯化后的亚油酸异构酶在SDS-PAGE电泳中只呈现一条带，并测得分子量约为46.6kDa。关键词

2、：嗜酸乳杆菌；亚油酸异构酶；分离纯化；SDS-PAGE电泳StudyonPurificationofLionleicIsmerasefromLactobacillusacidophilusWANGWu1,2，FUMin1，TANGXiao-ming1，PANJian2,*(1.SchoolofBiotechnologyandFoodEngineering,HefeiUniversityofTechnology,Hefei230009,China；2.EngineeringResearchCenterofBio-process,MinistryofEducation,Hefei230009

3、,China)Abstract：ThepurificationofLionleicismeraseinLactobacillusacidophiluswerestudiedinthispaper.CrudeenzymefromLactobacillusacidophiluswaspurifiedbyammoniumsulfatesolutionof40%～80%,dialysisandSephadexG-100gelfractionationchromatography,achievinganoverallpurificationof3.10-foldandaspecticactivit

4、yof475.45[U/(mgprotein)].ThepurifiedenzymewasasingledistinctproteinbandbySDS-PAGE,withanestimatedmolecularweightofabout46.6kDa.Keywords：Lactobacillusacidophilus；lionleicismerase；purification；SDS-PAGE中图分类号：Q558文献标识码：A文章编号：1002-6630(2007)12-0305-04共轭亚油酸(简称CLA)是一系列在C9，11或C10，1材料与方法12位具有双键的亚油酸(linole

5、icacid简称LA)的位置和几何异构体的总称[1]。研究发现，CLA具有抑制肿瘤[2-3]、1.1材料与设备抗动脉粥样硬化[4]、抗氧化等生理功能，在食品医药领1.1.1菌种及试剂域具有诱人的应用前景。目前获取CLA的方法主要有化嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilusl.1854)中科学合成法和生物合成法[5]，化学合成法产率较高，但产院生物所。物往往是多种异构体的混合物，且含环化副产物，难共轭亚油酸(99%)、亚油酸(60%)Sigma公司；以分离，制约了其在食品医药领域的应用；生物合成法K2HPO4、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、柠檬酸二则是利用亚

6、油酸异构酶将LA转化为高活性的c9，t11-铵、NaAc、葡萄糖、乳糖、NaCl、正己烷、考马18:2和(或)t10，c12-18:2CLA，应用前景广阔。斯亮蓝G-250、考马斯亮蓝R-250、聚乙二醇、Sephadex亚油酸异构酶(Lionleicismerase)是微生物细胞在培养G-100(AmershamBiosciencesABSE-751Sweden)、磷酸液中存在LA诱导的前提下，于菌体内生成的一种胞内氢二钠、十二烷基硫酸钠、巯基乙醇、丙烯酰胺、酶[6]，它只作用于具有cis9，cisl2-18:2二烯结构且羧基N,N'-亚甲基双丙稀酰胺、四甲基乙二胺、过硫酸铵、游离的脂

7、肪酸，不同的菌体可产生不同的亚油酸异构盐酸、Tris、脲、柠檬酸均为分析纯；溶菌酶上酶，相应地可生成不同的CLA异构体，该酶可以通过海源聚生物科技有限公司；低分子量标准蛋白中国科细胞形式催化LA转化为CLA的反应，也可以通过分离学院上海生物化学研究所；蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、出的膜形式进行反应。本实验以嗜酸乳杆菌为研究对均为生化试剂；脱脂奶粉食品级。象，探索其所产生的亚油酸异构酶的分离纯化条件，为1.1.2实验设备今后利用微生物酶法