巴氏染色液EA50染色液使用说明书

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1、上海科汇生物技术有限公司EA50染色液使用说明书【产品名称】EA50染色液【产品编号】EA50-OT-100，EA50-OT-500，EA50-OT-1L，EA50-OT-2.5L【包装规格】100ml500ml1000ml2500mL【预期用途】细胞质染色试剂，用于Papanicolaou染色法细胞学上使用的对比染料【检验原理】EA50染色液,Pap3B试剂为伊红Y和亮绿SF酸（加入了磷钨酸，PTA）染液的酒精溶液。Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6试剂和EA试剂继续染色。橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成

2、熟细胞和角质化细胞。之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。为获得优质的染色效果，EA50Pap3B试剂特性与KOHYPATH其他用于细胞学涂片染色试剂（苏木素HP，Pap1A试剂，OG-6，Pap2A试剂）相符。【主要组成成分】含生物染料级别（BSC）的伊红Y和亮绿SF，并添加磷钨酸和适当的稳定剂，两者浓度和比例不同于其他EAPap试剂。细胞学涂片染色：收集和准备细胞学材料的两种方法：收集细胞学样本后置于载玻片（VitroGnost）上，立即喷洒

3、固定液（CitoSpray）进行固定，干燥后染色备用。样本固定后可放置于95%乙醇（Histanol95）中30min。用液体基质的细胞学方法（LBC），刷子刷下细胞学样本，立即浸入固定液（CitoFix）固定。染色前，从固定液中分离样本细胞（离心固定液），置于载玻片上，准备进一步染色。巴氏（Papanicolaou）染色法，进行性染色：染色之前，样本材料应收集并固定于载玻片上。如样本已经用CitoSpray固定并干燥，应放置于95%乙醇（Histanol95）中10min，以去除聚乙二醇；若样本是经95%乙醇（Histanol95）溶液固定，

4、请忽略此步骤。细胞学样本染色过程中（用LBC法），包含低浓度乙醇，因此无需用递减梯度的乙醇进行水化。后续用苏木素HP，Pap1A染色。1.递减梯度浓度乙醇溶液（Histanol95,Histanol80andHistanol70）水化，并用蒸馏水或去离4组，每次上下跌落6-8次子水冲洗2.苏木素HP，Pap1A染色2-3min3.Scott溶液或显蓝试剂处理1min注：若没有此试剂，可直接用自来水冲洗3-5min4.递增梯度浓度乙醇溶液（Histanol70,Histanol3组，每组上下跌落6-8次80andHistanol95）进行脱水5.

5、OG-6，Pap2A染色2-3min6.95%乙醇（Histanol95）冲洗2次，每次上下跌落6-8次7.EA31，Pap3A试剂染色/EA50，Pap3B试2-3min上海科汇生物技术有限公司剂染色8.95%乙醇（Histanol95）冲洗上下跌落6-8次9.100%乙醇（Histanol100）脱水上下跌落6-8次10.100%乙醇（Histanol100）脱水3-5min11.二甲苯（BioClear）或其替代物（BioClearNew）上下跌落6-8次透明处理12.二甲苯（BioClear）或其替代物（BioClearNew）3-5m

6、in透明处理透明化处理后应⽴即⽤合适的封⽚剂进⾏封⽚。如果使⽤⼆甲苯（BioClear）透明化，对应使⽤KOHYPATH⼆甲苯基质的封⽚剂（BioMount，BioMountHigh，BioMountM，BioMountDPX，BioMountC，或普通BioMount）；如果是由⼆甲苯替代物（BioClearNew）透明化，使⽤BioMountNew封⽚。使⽤盖玻片覆盖。注意事项：为防⽌苏木素HP，Pap1A溶液沉淀和表⾯形成⾦属光泽漂浮物，使⽤前过滤处理。染色时间为非标准化、固定化，需要根据临床和实验经验来调控。建议的操作方法是根据KOHY

7、PATH试剂的特性和长时间的临床和实验经验。染色强度根据染色时间而定，实际染色操作需根据具体实验需求确定。在符合细胞学技术操作的前提下，染色流程可根据个人实验需求改变。巴氏（Papanicolaou）染色法，退行性染色：退行性染色法使样本染色后更加容易区分，细胞核结构更加清晰。染色之前，样本材料应收集并固定于载玻片上。如样本已经用CitoSpray固定并干燥，应放置于95%乙醇（Histanol95）中10min，以去除聚乙二醇；若样本是经95%乙醇（Histanol95）溶液固定，请忽略此步骤。细胞学样本染色过程中（用LBC法），包含低浓度乙

8、醇，因此无需用降低梯度的乙醇进行水化。后续用苏木素HP，Pap1A染色。1.递减的梯度浓度乙醇溶液（Histanol95,4组，每次上下跌落6-8Hi