资源描述：
《多拷贝策略在小肽表达中的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物工程学报ChinJBiotech2011,May25;27(5):684−689journals.im.ac.cnChineseJournalofBiotechnologyISSN1000-3061cjb@im.ac.cn©2011CJB,Allrightsreserved.综述多拷贝策略在小肽表达中的应用曹艳萍，单安山，马清泉，尹佳佳东北农业大学动物营养研究所，哈尔滨150030摘要:基因工程技术已经在大分子多肽表达上得到了广泛的应用。但是小分子多肽不稳定且易降解，使其表达后很难检测和纯化。多拷贝策略是将目的基因或是含
2、有目的基因的表达盒首尾串联，而串联构建多拷贝表达载体是目前解决小分子多肽表达量少的有效方法。总结和比较非对称粘性末端互补法、接头连接法、同尾酶法和表达盒串联法在多肽表达方面的应用情况，为小分子多肽的体外表达提供方法和思路。关键词:多拷贝，串联，多肽表达，应用Applicationofmulti-copiesinexpressionofsmallerpeptides:areviewYanpingCao,AnshanShan,QingquanMa,andJiajiaYinInstituteofAnimalNutrition,No
3、rtheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,ChinaAbstract:Thetechnologyofgeneticengineeringhasbeenwidelyusedtoexpressmacromoleculessuchasenzymes.However,itisdifficulttodetectandpurifythemicromoleculessuchassmallpeptides,becauseoftheirinstabilityanddegradability.Cons
4、tructionofmulti-copyrecombinantexpressionplasmidcanbeachievedbyinsertingmultipletargetgenesorexpressioncassettecontainingtargetgeneswiththesameorientationintoexpressionvector.Thisiseffectivetoincreasetheexpressionlevelofsmallpeptides.Inthisarticlewedescribedfourmet
5、hodsinordertoprovidesomeoptionalmethodsandideasfortheexpressionofactivesmallpeptides.Keywords:multi-copies,inseries,expressionofpolypeptides,application近年来，随着基因工程技术的发展，一些有生保健、生物制药和临床应用等方面有着广阔的前景。物活性的小分子多肽受到了高度的重视，国内外针但是由于其分子量小，在细胞中的稳定性不好，容易[1]对小分子多肽的大量研究表明某些小肽在动物营养
6、被宿主蛋白酶识别并降解为无活性的寡肽片段，另Received:October23,2010;Accepted:January5,2011Supportedby:NationalNaturalScienceFoundationofChina(No.31072046),ResearchFundfortheDoctoralProgramofHigherEducationofChina(No.20092325110009),ScientificResearchFundofHeilongjiangProvincialEducation
7、Department(No.11551z003).Correspondingauthor:AnshanShan.Tel:+86-451-55190685;E-mail:asshan@mail.neau.edu.cn国家自然科学基金(No.31072046)，高等学校博士学科点专项科研基金(No.20092325110009)，黑龙江省教育厅科学技术研究项目(No.11551z003)资助。曹艳萍等:多拷贝策略在小肽表达中的应用685外其表达量也少，在一定程度上制约了小分子多肽切位点，与经KpnⅠ、PstⅠ酶切的载体PET-3
8、0a相连的工业化生产。目前，采用构建多拷贝表达载体的接，成功构建了5拷贝的重组表达载体PET-30a-C5，策略可以有效提高小分子多肽的表达量和稳定性。经转化诱导表达后，融合蛋白占超声上清总蛋白的[2]Shang等分别构建了2、4和8拷贝的K6W-泛素重40％~50％。除用特定的限制酶酶切
