实验四 培养基的配制及微生物的分离纯化2

《实验四 培养基的配制及微生物的分离纯化2》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、实验四微生物的接种与分离技术实验内容实验目的实验原理操作步骤注意事项问题与思考实验目的1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。2.了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。3.熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。二实验原理培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质原则：目的明确;营养协调;控制PH、渗透压等条件;经济节约方法：查阅文献;精心设计;试验比较步骤：计算、称量、溶解、调PH、加琼脂、熔化、过滤、分装、加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查营养六要素碳源：提供微生物

2、繁殖所需碳元素的营养物质。用途：糖、蛋白质、核酸合成。氮源：提供微生物繁殖所需氮元素的营养物质。用途：蛋白质、核酸合成。能源：提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射能。生长素：微生物生长必需，但又不能自行合成的有机物。无机盐：提供微生物繁殖所需各种重要元素。水分：水是保证生命活动重要的介质。培养基种类:一、按成份的不同划分天然培养基、合成培养基、半合成培养基二、按培养基的物理状态划分固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途划分基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基的种类据组成成分可分为:1.合成培养基

3、：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。（如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。）2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。（如马铃薯蔗糖培养基。）3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。（如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。）1.液体培养基：不加凝固剂（常用凝固剂为琼脂）的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2-0.7%凝固剂而成的半固体状培养基。从培养基的物理状态可分为按照培养基的用途，可将其分为：加富培养基：

4、加富培养基是指在普通培养基里加过血、血清、动物（或植物）组织液或其他营养物质（或生长因子）的一类营养丰富的培养基，用以培养某种或某类营养要求苛刻的异养微生物选择培养基：选择培养基是根据某种或某一类群微生物的特殊营养需要或对某种化合物的敏感性不同而设计出来的一类培养基。利用这种培养基可以将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。鉴别培养基：普通培养基中加入能与某种代谢产物发生反应的指示剂或化学药品，从而产生某种明显的特征性变化，以区别不同的微生物。牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配

5、方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.0～7.2(后调)高氏1号培养基高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下：可溶性淀粉20g，KNO31g，NaCl0.5g，K2HPO4·3H2O0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，琼脂15～20g，水1000mL，pH7.4～7.6。查氏合成培养基查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的培养基,其配方如下：NaNO33g,K2HPO41g,KCl0.5g,MgSO4.7H2O0.5g,FeS

6、O40.01g,蔗糖30g,H2O1000ml,pH自然麦芽汁培养基用来培养酵母菌,干麦芽粉加4倍水,在50-60℃保温糖化3-4小时，用碘液试验检查至糖化完全为止,调整糖液浓度,煮沸后，过滤，调pH为6.0。培养基配制程序9.加塞10.包扎11.灭菌12.搁置斜面、倒平板13.无菌检查计算称量溶解调pH加琼脂融化过滤分装消毒与灭菌消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。方法：物理的方法：加热、过滤、辐射化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生

7、素等。一、概念：（一）清洁（cleaning)：是指用物理方法清除物体表面的污垢、尘埃和有机物.目的:去除和减少微生物，但并非杀灭微生物。（二）消毒(disinfection)：用物理或化学的方法清除或杀灭除芽胞以外的所有病原微生物，使其数量减少到无害程度的过程。（三）灭菌(sterilization)：用物理或化学方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病的微生物，以及细菌的芽胞的过程。二、消毒灭菌的方法消毒灭菌方法有两大类：物理消毒灭菌法和化学消毒灭菌法消毒灭菌方法物理消毒灭菌法化学消毒灭菌法热力消毒灭菌光照消毒法微波消毒灭菌浸泡法

8、喷雾法擦拭法熏蒸法干热湿热燃烧法干烤法煮沸消毒法压力蒸汽灭菌手提式压力蒸汽灭菌器卧式压力蒸汽灭菌器预真空压力蒸汽灭菌器日光曝晒紫外线灯管消毒电离辐射灭菌法臭氧灭菌灯灭菌注：每一种消毒灭菌的方法、特点、适用物品、注意事项都是掌握的重点。